钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,CN),是Ser/Thr蛋白磷酸酶家族成员,其活性依赖于钙离子-钙调素(Ca2+/CAM)的调控。在动物体内,CN参与着众多重要的生命活动,如免疫应答、神经元的发育、学习记忆活动等。CN的磷酸酶活性受到包括Ca2+/CaM在内的多种因素的调节。例如Mn2+、Ni2+等金属离子、CsA等小分子药物、调节蛋白因子RCANs家族等。对CN酶活性调节因素的广泛研究会为阿尔茨海默氏症(AD)等相关疾病的新药物筛选、治疗方法的建立等提供重要的理论指导。　　 阿尔茨海默氏症(Alzheimers disease,AD)又称老年痴呆症,是一种渐进性中枢神经系统退行性疾病,主要表现为进行性认知障碍和记忆力损害。AD致病机理的假说中包括:AD病人脑中蛋白磷酸酶活力的异常会引起tau蛋白发生异常过度磷酸化,tau蛋白的过磷酸化可以改变胞内神经骨架微管蛋白的稳定性,并丧失其促微管组装的生物学活性,引起胞内分子间广泛交叉连接,从而导致神经原纤维缠结(neurofibdllary tangle,NFT)的形成,这将破坏神经元及突触的正常功能,引起大脑认知与记忆等功能障碍,导致AD的发生。　　 RCANs家族成员是CN的内源性调节因子,参与了细胞内CN活力调节过程。本实验中,长期作用环孢菌素A(CsA)的小鼠,其脑组织CN酶活力显著被抑制。同时脑部RCAN1蛋白异常超表达。Western blotting结果显示RCAN1-1L积累量是RCAN1-4的2倍以上。Ermak等人的研究表明AD病人脑中RCAN1-1L也远多于RCAN1-4。RCAN1-1L蛋白的过表达可能在AD病人脑中CN酶活力抑制过程中发挥了重要作用,从而造成tau蛋白的过度磷酸化。本实验第二部分中,从小鼠脑部克隆出RCAN1-1L基因,构建了RCAN1-1L基因表达质粒,优化了RCAN1-1L蛋白纯化流程。体外活力测定实验测定了RCAN1-1L蛋白对CN全酶活力的抑制情况。这些结果暗示着RCAN1-1L蛋白可能在AD致病机制及CN信号通路调节中,起更重要作用。因此,本实验第三部分尝试构建了RCAN1-1L过表达的SY5Y细胞模型,结果证明RCAN1-1L蛋白短时间过表达能够引起细胞内CN活力强烈的抑制效果。RCAN1-1L过表达细胞模型可以用于筛选治疗AD的药物,通过药物作用降低RCAN1-1L表达水平,提高CN酶活力水平,从而缓解一系列AD病理症状的发生。