拟南芥NCED4基因和紫花苜蓿MsFTa基因的克隆及功能鉴定

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:hedongxu2288
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本研究以紫花苜蓿和拟南芥为研究对象,主要利用基因工程、转基因技术和表型分析,分析MsFTa和NCED4的功能,为相关功能基因研究及紫花苜蓿基因的转基因应用奠定了基础。主要试验结果如下:1.利用PCR技术从野生型拟南芥中克隆出NCED4基因,全长1785bp,编码595氨基酸,不含有内含子,从拟南芥中分离出的NCED4蛋白与其他物种的同源蛋白相比,具有较高程度的同源性和相似的保守区,且不存在信号肽。2.并通过DNA重组技术将其连接到pBIl21载体上,成功构建植物表达载体pBI-NCED4;将表达载体转化到感受态农杆菌株GV3101中,利用花序浸泡法获得具有卡那霉素抗性的转基因拟南芥植株。对再生植株进行检测表明,目的基因转入拟南芥基因组中,并在转基因拟南芥中成功过量表达。基因功能与植物体内脱落酸的调控有关。3.实时定量分析显示,NCED4基因在拟南芥不同组织中存在着明显的差异性表达,在叶片中表达量最高,在花中表达量较低;NCED4基因表达量受外援激素的影响较为明显:在一定脱落酸的作用下,基因相对表达量随着时间的累积先升高后降低,而在一定量赤霉素的作用下,基因相对表达量随着时间的累积降低。4.利用PCR技术从紫花苜蓿中克隆出MsFTa基因,全长528bp,编码176氨基酸,从紫花苜蓿中分离出的MsFTa蛋白与其他物种的同源蛋白相比,具有较高的同源性和相似的保守区,不存在信号肽。5.构建植物表达载体pBI-MsFTa,并最终获得具有卡那霉素抗性的转基因拟南芥植株。对再生植株进行检测表明,目的基因转入拟南芥基因组中,并在转基因拟南芥中成功过量表达。基因功能与植物体开花调控有关。6. MsFTa在所选的组织中(包括根,茎,叶,花)均有表达,但在花器官中表达量最高,根中表达量较低;而通过赤霉素处理,MsFTa基因在外源赤霉素的诱导及低温处理条件下,MsFTa基因表达量呈现明显变化。给予这两点,可以做出推测:MsFTa可能在赤霉素调节和春化调节的植物开花上起调控的作用。
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