抗菌肽DCD-1L在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

来源 :兰州理工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:suwenyin52
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:Dermcidin (DCD)是德国科学家Schittek B等首先在人汗腺中发现的能特异表达的基因,DCD-1L是其衍生物,同样具有广谱抗菌性,为近年来国内外学者的研究热点。通过基因工程手段构建重组表达载体pET-32a-DCD-1L,在大肠杆菌transetta(DE3)中诱导表达目的蛋白,并鉴定其抑菌活性,为进一步研究其抗菌机理及实践应用研究奠定基础。方法:根据抗菌肽DCD-1L的基因序列和氨基酸序列,以及大肠杆菌对密码子的偏爱性,人工设计并合成了2条DCD-1L基因的寡核苷酸片段,利用这两条基因片段通过重叠延伸PCR (overlap extension PCR)扩增出完整的DCD-1L编码序列,接着用酶切、连接、转化等系列方法将此基因克隆到原核表达载体pET-32a中获得重组表达载体PET-32a-DCD-1L,并通过PCR、双酶切进行验证,将初步验证正确的重组质粒进行测序鉴定。将鉴定正确的重组体转化E.coli transetta(DE3)菌株,经终浓度0.5mmol/L IPTG在低温下诱导表达后,裂解细胞后提取蛋白菌液,用SDS-PAGE分析蛋白表达状况,并用抑菌圈实验检测其表达活性。结果:经双酶切分析、DNA测序验证构建的重组质粒,证实DCD-1L基因正确地插入到pET-32a中,得到重组表达质粒pET-32a-DCD-1L; SDS-PAGE检测DCD-1L在28KDa处有目的蛋白条带,抑菌圈实验结果显示抗菌肽DCD-1L对地衣芽胞杆菌,金黄色葡萄球菌,绿脓杆菌及肺炎链球菌均有明显的抑制活性。结论:成功构建了重组质粒pET-32a-DCD-1L,并获得了对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑菌活性的抗菌肽DCD-1L,本研究为重组抗菌肽的表达和临床应用研究奠定了基础。
其他文献
"承天之明"和"尊贤重士"是取自《新语》和《汉书》的两句话,分别代表了君主承圣人之业以及要尊重属下两个维度。它们的背后,是秦至西汉社会对"圣""贤"观念理解的差别。不同帝
The Huhehu Sag is one of the most important oil and gas depressions in the Hailar Basin. However, the origin of Huhehu oil is still controversial. Previous stud
采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳,对网纹石斑鱼的背肌,肝,心,脑,晶状体,肠,脾,性腺和肾等九种器官组织中的乳腺脱氢酶(LDH)同工酶分析比较,结果表明网纹石斑鱼的LDH同工酶存在明显的组织特异性
会计诚信与否不仅影响到国家、单位、企业,还会影响到每一个人。当前会计诚信缺失给社会造成了很多不良的影响,因此如何建立会计诚信是当前会计行业亟待解决的一个问题。笔者
对长春市8种(品种)主要冷季型草坪草种种子发芽率进行了测定,结果表明,8个草种(品种)发芽率为14%~94.0%,发芽势为4.0%~89.0%,其中“匍匐”紫羊茅、草地雀麦、剪股颖和冰草4个草种(品种)发芽早,发
毛叶木瓜观赏效果良好,本文在不同地块通过不同覆盖措施、不同种粒数进行播种实验,结果表明:不同覆盖措施,出苗期、出苗率不同。两地块都以覆土+覆地膜出苗期早,出苗迅速。覆土+覆锯
从平等、同意以及政治参与三个维度,可以为黄宗羲政治思想的"民主性"问题建立新的理解架构。《明夷待访录》以士治而非民主政体为中心,但在上述三维度中都体现出对民主价值的
于老师:您好!最近,我们学习了“第一次世界大战”一课,我们知道.一战前形成了德、意、奥三国同盟和英、法、俄三国协约两大军事侵略集团。但一战爆发后,三国同盟之一的意大利为什
<正> 近年来质控图在医院管理中的运用日趋普遍,在刊物上也屡见应用实例与讨论。本讲座介绍质量控制图的基本原理与方法、医院资料的特点及应用中的几个问题。 1924年美国休
以某矿煤层的地应力及煤岩的力学性质数据为基础,针对不同地应力对煤体水力压裂起裂压力及裂缝扩展状态的影响问题,采用理论分析和数值模拟方法建立了力学模型,求解了不同地