本文从实验室保藏的能有效拆分制备L-薄荷醇的菌株中克隆脂肪酶(Pseudomonas alcaligenes X1和Stenotrophomonas maltophilia X2),实现其在大肠杆菌中高效表达,并对表达产物进行了酶学性质研究。分别构建了两个菌种的基因文库,通过平板水解圈法初筛以及气相色谱验证,成功克隆到序列长度分别为1575bp的pal和1518bp的sml,通过氨基酸序列的分析,两酶都包含活性中心GISYG,该酶属于Serine水解酶类型,催化中心包括Ser-Asp-His.通过氨基酸序列对比,构建了进化树及结构分析。以pET30a (+)为载体,E.coil BL21(DE3)为宿主实现两酶的表达,蛋白大小为51kDa。经优化表达后,两酶的水解p-NPO活力分别达到89000U/L和90600U/L。经镍离子柱亲和纯化后,对两酶进行酶学性质分析,分别考察了酶反应的最适温度、pH、底物特异性以及金属离子对酶的作用。利用重组脂肪酶制备L-薄荷醇实验显示,产物e.e.%均大于99%。本实验为L-薄荷醇制备用脂肪酶提供新的基因和酶序列,为该酶的后期改造以及工业化应用奠定基础。