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肺炎克雷伯菌是临床感染中常见的革兰阴性杆菌,而β-内酰胺类抗生素是目前治疗该菌引起感染的主要药物。肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产β-内酰胺酶。近年来的研究表明,由质粒介导产生的β-内酰胺酶在耐药过程中起重要作用,并能在同种甚至不同种细菌之间迅速传播。质粒可同时携带多种耐药基因,如超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)和金属β-内酰胺酶(MBLs)编码基因等,携带这些酶的细菌常呈多重耐药趋势,这类细菌极易在医院感染中引起暴发流行,因此,准确检测β-内酰胺酶及其发生,明确多重耐药菌产生机制,是指导抗感染治疗和防止多重耐药菌播散的关键。
目的:分析肺炎克雷伯菌多重耐药表型及质粒型β-内酰胺酶基因,探讨肺炎克雷伯菌耐药机制,为制定临床抗感染的防治策略打下基础。
方法:从哈尔滨地区连续收集非重复的肺炎克雷伯菌231株,经药敏初筛和酶表型确认试验确定产β-内酰胺酶菌株;PCR方法检测分离菌株的ESBLs、AmpC酶和MBLs基因分布;质粒消除试验进行耐药基因定位;进一步用药物敏感性试验(MIC、纸片法)确定产酶菌的耐药表型,分析产酶菌基因型与耐药表型关系。
结果:临床分离肺炎克雷伯菌中,175株耐三种以上抗生素,为多重耐药菌,占分离菌的75.8%(175/231)。产ESBLs肺炎克雷伯菌检出率为52.4%(121/231),其中bla<,TEM>、bla<,SHV>和bla<,CTX>基因的分别占49.6%、41.3%和33.8%。共检测出产AmpC酶肺炎克雷伯菌26株,占11.3%(26/231),其中ACT型、DHA型、CIT型分别占产AmpC酶菌的50%、30.7%和19.2%,同时产DHA和ACT型菌占19.2%。产MBLs肺炎克雷伯菌27株,占分离菌株的11.7%(27/231),全部为VIM型。产三种β-内酰胺酶菌均为多重耐药菌,其中ESBLs阳性株对一代、二代和三代头孢菌素的耐药率均在65%以上。产AmpC酶菌对头孢西丁显著耐药,耐药率为96.2%,产MBLs菌对亚胺培南耐药率高于产其它两型酶菌株,为40.7%,差异有统计学意义。质粒消除实验证实大多数产酶菌耐药基因位于质粒上。
结论:肺炎克雷伯菌临床分离株中75.8%为多重耐药菌,对临床上常用的β-内酰胺类抗生素和非β-内酰胺类抗生素耐药显著;多重耐药菌形成的主要机制为产ESBLs、AmpC酶和MBLs,其中ESBLs的分离率最高,是主要耐药机制,同时检测出一定比例的产AmpC酶菌株和产MBLs菌株。产AmpC酶菌主要由质粒介导,对头孢西丁高度耐药。产MBLs菌耐药基因也以质粒介导为主,对亚胺培南敏感性显著降低。