华泽兰Eupatorium chinense L又名多须公、六月雪、斑骨相思,系菊科泽兰属多年生植物,以根入药,名为广东土牛膝,具有清热解毒、凉血利咽的功效,是广东省习用喉科要药,可用于白喉,扁桃体炎,咽喉炎,感冒发热,麻疹,肺炎,支气管炎等症。本药材作为中药饮片及原料药入制中成药已有几十年的临床应用历史,疗效确切,市场对其需求量一直有增无减,如广州潘高寿药业股份有限公司的东梅止咳颗粒、广州陈李济药业股份有限公司、广东一片天医药集团制药有限公司等生产的喉疾灵胶囊和片剂,以及各大医院制剂的广东土牛膝合剂、糖浆剂、颗粒剂及口服液等。一直以来,广东土牛膝药材全部来源于野生资源,随着资源不断采挖,造成原料药材供应紧张。在自然条件下华泽兰自我更新能力弱,难以形成优势的生长居群,部分企业已建立药源基地进行华泽兰种苗繁育与种植。本文通过对华泽兰种子生物学特性研究,探讨华泽兰种子萌发适宜条件,为中药材种苗繁育与生产质量关键技术提供理论依据；同时建立华泽兰离体快速繁殖体系,不仅加快大量良种繁育,而且能在一定程度上保持母本的优良性状,避免扦插繁殖产生的植株生长良莠不齐、生长周期长等情况,为保护华泽兰种质资源及其可持续利用、华泽兰优质种苗的产业化生产奠定基础。本文主要研究内容如下：1国内外研究综述查阅了大量与本研究的国内外文献资料,归纳总结了华泽兰种质资源的研究现状,泽兰属植物组织培养与种子生物学特性研究概况,内容涵盖了华泽兰的本草考证、生药学、化学质量、药理药效及临床应用,泽兰属植物种子生物学特性与组织培养技术等方面的研究进展。2华泽兰种子生物学特性研究(1)常规检测：华泽兰种子外表纵径1.5-3.1mm,横径0.3-0.6mm。供试种子成熟种子平均饱满度为61%,千粒重为0.166g,平均净度84.45%,含水量为10.3%。氯化三苯基四氮唑法测得种子生活力为44%。(2)萌发试验：华泽兰种子萌发的适宜温度为10-25℃。播种前可适当添加浓度0.1mg·ml-1的6-BA浸泡20min,可促进萌发；2,4-D和NAA对种子萌发都有一定的抑制作用。酸、碱和温水三种前处理均不利于华泽兰种子的萌发。光照有利于华泽兰种子的萌发。保留果皮、低温保存是有利于延长种子的寿命,适宜4℃冰箱封袋保存。(3)细胞膜透性：考察不同温度、不同植物生长调节剂、不同前处理、不同贮藏方式共四种处理对华泽兰种子细胞膜透性的影响,结果显示华泽兰种子浸出液电导率与种子发芽率的相关系数均达一0.9以下,负相关性较为密切,表明种子细胞膜完整性较差,显示种子生活力较低。3华泽兰离体快繁体系的建立(1)无菌苗的获得：选择顶芽、嫩茎节和种子三种外植体为接种材料,以嫩茎节的成活率高,诱导出的新芽较壮。外植体表面消毒最佳时间配比为以75%酒精预处理10s,再用0.1%HgC12溶液进行灭菌10min。取材时间可选择春季3-4月份。(2)丛生芽诱导：试验以正交表L16(45)设计6-BA和IBA两种植物生长调节剂及4个浓度水平,结果显示6-BA对丛生芽的诱导影响作用大于IBA, MS+6-BA1.00mg·L-1+IBA0.05mg·L-1培养基利于形成丛生芽,30d的增殖系数为9.43,用于继代增殖。光照条件可选择强度为2000-30001x的直光培养,光照时间是每天10h。(3)壮苗生根：考察了培养基的类型、激素的种类及浓度、活性炭及天然提取物的类型对组培苗生根壮苗的影响。结果显示选择1／2MS为生根的基本培养基,添加0.05～0.10mg·L-1IBA有利于诱导生根,生根率100%；加入活性炭的适宜浓度为0.1-0.2g.L-1；添加浓度为5%的苹果提取物或椰子提取物可促进华泽兰组培苗生长。(4)炼苗移栽：考察了开盖炼苗时间和不同基质组合对华泽兰幼苗成活率的影响。适宜的开盖炼苗时间为10d,此时植株叶片气孔开闭率达到稳定状态,移栽成活率较高。河沙、园土、蛭石配比为1：1：2可作为最佳的移栽基质,此时华泽兰幼苗成活率96.67%,长势良好。4华泽兰组培苗质量初步检测初步探讨华泽兰组培苗与传统野生资源在品质上是否存在差异,结果显示,以试管苗中根部黄酮量居高,而多年生的栽培品以及野生品都比较低,组培苗移栽的华泽兰根与茎叶中总黄酮含量分别大于扦插栽培的华泽兰总黄酮含量。