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本研究以哺乳动物昆明小鼠为(♀)试验动物,以陕西佛坪国家级自然保护区巴山木竹叶提取物(Bamboo leaf extract of Bashania fargesii)为试验材料,以不同温度、不同竹叶提取物(Bamboo leaf extract,BLE)灌注剂量为试验条件,使用2×2因子设计(饲养温度:常温25℃和低温4℃;BLE灌注剂量:0 mg/kg BW和340 mg/kg BW),将试验分为四个组(分别是常温对照组:NT+CON;常温BLE灌注组:NT+BLE;低温对照组:LT+CON;低温BLE灌注组:LT+BLE),每组6个重复,每个重复10只鼠,共240只鼠,开展为期28d的动物体内试验,试验分两个阶段进行研究,14d和28d。通过血生化、抗氧化能力、病理学诊断、细胞凋亡、凋亡相关基因mRNA表达量等检测指标探讨不同温度、BLE灌注剂量以及二者的相互作用对小鼠血生化、肝脏抗氧化功能与细胞凋亡的影响,探讨巴山木竹叶在动物体内的生物学活性,以期推测大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)冬季觅食策略的内在驱动机制。内容1竹叶提取物对低温环境下小鼠血生化的影响本内容利用全自动生化分析仪检测小鼠血生化指标。蛋白质代谢结果显示,与NT组相比,LT组小鼠14d和28d时ALT(丙氨酸氨基转移酶)活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高,上升幅度分别为46.09%、18.75%;温度与BLE灌注剂量对28d时AST(天冬氨酸氨基转移酶)、ALT、Alb(白蛋白)有显著交互作用(P<0.05)。与NT+CON组相比,LT+CON组AST、ALT活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高,上升幅度分别为18%、34.43%;与LT+CON组相比,LT+BLE组AST活性极显著降低(P<0.01),降低幅度为28.02%;与NT+BLE组相比,LT+BLE组Alb含量显著降低(P<0.05),降低幅度为12.16%。脂质代谢结果显示,与NT组相比,LT组TC(总胆固醇)含量在14d时显著降低(P<0.05),降低幅度为9.44%,TG(甘油三酯)含量在28d时极显著升高(P<0.01),升高幅度为32.81%;与CON组相比,BLE组TC含量在14d时显著升高(P<0.05),升高幅度为11.11%。内容2竹叶提取物对低温环境下小鼠肝脏抗氧化功能的影响本内容利用酶标仪检测小鼠肝脏中T-AOC(总抗氧化能力)、GSH(谷胱甘肽)和MDA(丙二醛)的含量,实时荧光定量PCR法(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)检测SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化氢酶)、GSH-px(谷胱甘肽过氧化物酶)mRNA相对表达量。结果显示:与NT组相比,14d时LT组T-AOC、GSH的含量极显著上升(P<0.01),升高幅度分别为15.85%、20.30%;与NT组相比,28d时LT组T-AOC显著下降(P<0.05),下降幅度为7.31%,MDA含量显著上升(P<0.05),升高幅度为10.59%;温度与BLE灌注剂量对14d时MDA的含量有显著交互作用(P<0.05)。与NT+CON组相比,LT+CON组MDA的含量显著下降(P<0.05),下降幅度为20%;与LT+CON组相比,LT+BLE组MDA的含量显著上升(P<0.05),升高幅度为20.65%;温度与BLE灌注剂量对28d时T-AOC和CAT mRNA相对表达量存在显著交互作用(P<0.05)。与NT+CON组相比,NT+BLE组T-AOC极显著下降(P<0.01),下降幅度为13.94%,LT+CON组T-AOC和CAT mRNA表达量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)下降,下降幅度分别为19.37%和18.92%;与LT+CON组相比,LT+BLE组T-AOC极显著上升(P<0.01),上升幅度为13.91%。内容3竹叶提取物对低温环境下小鼠肝脏病理组织学变化和细胞凋亡的影响本内容利用光学显微镜观察小鼠肝脏病理组织学变化,流式细胞术检测肝脏细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)检测细胞凋亡相关基因mRNA相对表达量。肝脏病理组织学观察显示,与NT+CON组相比,LT+CON组小鼠肝细胞在不同时间点均出现不同程度的水泡变性;与LT+CON组相比,LT+BLE组小鼠肝细胞肿胀情况明显减轻。肝脏细胞凋亡率结果显示,28d时,与NT组相比,LT组细胞凋亡率极显著上升(P<0.01),上升幅度为30.13%;与CON组相比,BLE组细胞凋亡率显著下降(P<0.05),下降幅度为15.23%;温度与BLE灌注剂量对14d时肝脏细胞凋亡率有显著交互作用(P<0.05),与NT+CON组相比,LT+BLE组细胞凋亡率显著上升(P<0.05),上升幅度为28.21%;与LT+CON组相比,LT+BLE组细胞凋亡率显著下降(P<0.05),下降幅度为24.55%。肝脏细胞凋亡相关基因mRNA相对表达量的结果显示,与NT组相比,LT组14d时Caspase-3mRNA表达量极显著上升(P<0.01),上升幅度为40%。我们的研究结果表明低温对小鼠肝脏造成了一定的氧化损伤,灌胃340mg/kg BW的BLE能增强肝脏的抗氧化能力,缓解由低温引起的肝脏功能和结构的损伤。根据本研究结果推测陕西佛坪大熊猫在秋冬季节以该种巴山木竹叶为食,可能有助于缓解其面临的寒冷胁迫,这可能是大熊猫在秋冬季节优化觅食策略的内在原因之一,有待于进一步研究。