【摘 要】
:
狂犬病病毒是单股负链RNA病毒,其基因组长约12kb,由3’端至5’端依次排列着N、P、M、G和L5个狂犬病毒的结构基因,分别编码核蛋白、磷蛋白、基质蛋白、糖蛋白和转录酶大蛋白。由G
论文部分内容阅读
狂犬病病毒是单股负链RNA病毒,其基因组长约12kb,由3’端至5’端依次排列着N、P、M、G和L5个狂犬病毒的结构基因,分别编码核蛋白、磷蛋白、基质蛋白、糖蛋白和转录酶大蛋白。由G基因编码的糖蛋白,是病毒与宿主细胞结合的配体,介导了病毒与靶细胞的结合及在神经系统的分布,不但与病毒的毒力、致病性密切相关,而且是狂犬病毒的主要保护性抗原,能刺激机体产生中和抗体,保护机体抵抗病毒的感染。而P基因编码的磷蛋白则是在病毒的复制工程中,与转录酶大蛋白一起发挥作用,磷蛋白是L蛋白的必须辅助因子。本实验采用Bac-to-Bac系统,将糖蛋白基因和磷蛋白基因分别由已构建好的pMD-18T-G载体、pMD-18T-P载体克隆入杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,并通过转座将目的基因插入到杆状病毒基因组中,形成含有目的基因的重组杆状病毒。然后将其转染Sf9昆虫细胞,并通过IFA和Western blot等方法来检测目的基因的表达。具体结果如下:
根据昆虫细胞对密码子的偏好性,对狂犬病病毒ERA毒株G蛋白基因进行优化并人工合成。根据优化后的序列设计用于扩增目的基因的特异性引物,将其克隆入重组转移载体pFastBacHTA中,成功构建重组转移载体pFastBacHTA-G。然后再将该重组质粒转化DH10Bac/AcNPV感受态细胞,经三重抗性和蓝白斑筛选,获得糖蛋白的杆状病毒表达质粒rBacmid/AcNPV/G。重组表达质粒转染Sf9细胞的IFA鉴定结果显示;与阴性对照相比,转染的Sf9细胞能与抗狂犬病毒G蛋白的单克隆抗体发生反应。
将狂犬病病毒P基因插入到pFastBacHTA载体,通过发生转座,将目的基因插入到杆状病毒基因组中,从而形成含有P蛋白基因的载体质粒rBacmid-P,然后将其转染Sf9细胞。转染后120h,利用4%甲醛固定细胞进行IFA鉴定,同时,收集转染后发生病变的细胞用于SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示,磷蛋白在Sf9细胞中获得了表达。
其他文献
如何培养学生写作的兴趣和自信,让孩子们愿意写、喜欢写、乐于写是新课标的重点,无疑这也是摆在我们眼前的一道难题。如何从小学低年级就有意识地培养学生的写作兴趣与写作能力?通过多年低年级语文新课程教学实践,我注重通过以下途径来培养学生的作文能力。 一、浅化入门,培养自信心 什么是作文,怎样才能写好作文及培养良好的作文习惯,这些都是在长期的作文实践中慢慢理解、体会、造就的。如果一开始就和学生讲述许多作
小学升初中,是人生的一个转折点,作者对小学生的作文现状和初中生的作文现状进行了分析,并对记叙文写作方面作了探讨,以使学生对写该类文章有所启发.
CVD和VCD、DVD均为数字视频技术产品,三者之间究竟存在哪些不同之处呢?技术标准:CVD和DVD采用的均是国际最新MPEG—2编解码标准,图象清晰变较高,可达350~400线;而VCD则采用的是MPEZG—1编解码标准,图象质量一般,分辨率仅为
乡镇中学条件有限,口语训练的机会也不太多,这就导致如下的情况:有些学生用方言跟熟人聊天时,可以做到口若悬河,滔滔不绝,但是一要他站起来用普通话回答问题,或到讲台前面讲几句话,他就变得手足无措,语无伦次。为什么会有这么大的差别呢?其主要原因就在于他们在当众说话时心情过于紧张。要消除这种紧张的心理状态,最好的办法就是加强锻炼,多在公众场合抛头露面,多发言讲话,这样讲得多了,经验也就丰富了,腼腆紧张的心
摘 要: 本文主要从个性化初中语文教学实施意义、原因及作用出发,进一步分析个性化初中语文教学的实施方法,倡导学生表现自我、发扬自我,从而促进学生个性发展,成为适应现代社会的创造性人才。 关键词: 初中语文课程 个性化教学 教学策略 个性化的初中语文教学重点在于倡导学生自由学习,其目标在于养成学生创造性、独特性的思维。那些优秀的创造性人才,我们在他们身上可以发现这样一个特点,个性越是独特、鲜
回首高中执教,我感觉高中语文阅读教学一直在一个相当封闭的体系内轮回,有人把这种阅读称之为小阅读。所谓小阅读,它只是课堂中营造出来的,与实际阅读有一定的距离。表面上看,它是提高阅读能力的专项训练,是被剥离出来的,与生活中的大阅读迥异。其实一个成熟的阅读者,是很丰富很立体的,然而,过于封闭的阅读环境、过于沉闷的阅读方式把学生的这些鲜活的个性品质给扼杀了。为此我结合自己的教学实践,认为应该从深挖和精选阅
在新课程改革的今天,教育教学理念是教师改革的重点,在这种大环境下,安阳市龙安区教体局外学经验,内修教法,历时一年多推出“四环节”教学法,其基本内容是:“创设情境、质疑自探—分组学习、合作交流—精讲点拨、巩固训练—检测反馈、拓展运用”,并在全区推广。这就要求教师要根据不同学生的心理特点和教材内容,课堂上充分体现教师的主导作用和学生的主体作用,科学把握教学四个环节,真正把课堂还给学生,创造性地完成教学
摘 要: 成功的文章,必须源于心底;成功的教学,必须激发学生的兴趣。面对作文训练,教师要拓宽学生写作的渠道,激发学生的写作兴趣,为学生创设自由练笔的空间。 关键词: 作文教学 兴趣 尊重学生 曾问过高中生:“你最不喜欢的作业是什么?”85%的学生竟有着同样的答案:“作文!”造成这种令人吃惊结果的原因是多方面的,但主要原因是很多学生对写作没有兴趣。 兴趣的产生,往往源于成功。因此,提高学生
摘 要: 本文呈现二〇〇九年十月至二〇一〇年四月沭阳县建陵中学“克服高中生厌学,提高教学效率策略的研究 ”课题研究小组对高中生厌学现象的调查结果,初步分析高中生厌学心理、行为的成因,为研究克服对策提供科学依据。 关键词: 高中生 厌学 语文教学 一、调查的目的与意义 近十年来,苏北地区的教育层次得到了巨大提升。城镇高中办学数量增多、规模变大,到了二〇〇九年,沭阳的高中多达17所,其中部分
是大学教材的下放内容,而无论是在导数概念的学习中,还是导数应用,导数的几何意义都足一个极其重要的部分.这个知识点也是各种练习考试中的热点,因此我在设计导数及其应用的