氟对小鼠海马神经毒性作用及相关基因的影响

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[目的]研究氟对小鼠海马组织中CREB、BDNF、NCAM、SCF 和 VEGF在基因和蛋白水平的表达,以期探索氟对海马神经发生的影响,探索氟的神经毒性作用,为临床氟中毒症状和进一步采取干预措施提供动物性实验依据。[方法]选用昆明雄性小鼠48只,适应环境一周后,按体重随机分成对照组、低氟组、中氟组和高氟组,每组12只。对照组供给蒸馏水,处理组依次供给含有25、50、100mg/L NaF的蒸馏水并在同一条件下饲养。攻毒8周后处死,采用HE染色、透射电子显微镜、QRT-PCR以及western blotting等技术手段对小鼠海马形态学、海马突触超微结构以及神经发生相关因子cAMP应原件结合蛋白(CREB)、脑源性生长因子(BDNF)、神经细胞粘附因子(NCAM)、干细胞因子(SCF)、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA基因和蛋白表达水平进行了检测。[结果]1.HE染色结果显示:对照组细胞排列有序,细胞核大而圆,位于细胞中央,核仁清晰可见。处理组神经细胞发生了明显的变化,神经细胞排列无规则,神经细胞数目少,细胞膜与周围组织分界模糊,神经元皱缩。2.应用QRT-PCR检测与小鼠海马神经发生相关因子的mRNA表达水平,结果显示:与对照组相比,高氟组CREB、BDNF、NCAM和SCF mRNA表达水平显著降低,VEGF无差异显著性。western blotting检测结果表明:所有处理组CREB蛋白表达的水平与对照组相比均有差异显著性;BDNF蛋白在所有处理组与对照组相比表达降低,高氟组与对照组比较差异显著(P<0.01)。NCAM蛋白表达水平的多少,随着氟浓度的增加而降低,且其蛋白表达水平在中和高氟组与对照组相比有差异显著性。中、高氟组SCF蛋白表达水平虽然低于对照组,但并无统计学意义。3.透射电子显微镜下观察,与对照组相比,处理组海马神经细胞的细胞核的形状变得不规则,核膜的轮廓模糊,双层结构破坏,核浆中的电子密度增加,染色质聚集。海马突触间隙变宽,突触后膜致密物密度变薄,突触活性区变短,突触前后膜结构模糊,突触小泡明显减少,突触内线粒体肿胀,线粒体内嵴断裂消失。[结论]攻毒60日龄后,氟影响了小鼠海马的组织形态和超微结构,对海马神经产生了毒性作用。这一过程可能是氟通过改变CREB、BDNF和NCAM在基因和蛋白水平的下调,影响突触的可塑性,从而影响了海马的神经发生,产生的神经毒性作用。
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