杨梅树皮、杨梅叶和杨梅果体外抗氧化物质基础研究

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杨梅(Myrica rubra (Lour.) Sieb.et Zucc.)系杨梅科(Myricaceae)杨梅属((Myrica)多年生常绿乔木。杨梅树皮、叶、果具有抗氧化、神经细胞保护以及抗肿瘤等多种药理活性。本论文将探讨杨梅树皮、叶和果发挥体外抗氧化活性的物质基础。首先采用化学评价和细胞评价分别对杨梅树皮、叶和果提取物进行体外抗氧化能力评价。化学评估法选择自由基清除法(DPPH-)和总还原能力测定法(FRAP),以上实验得到的抗氧化活性顺序为:树皮>果>叶;细胞评价法采用H202诱导的PC12细胞氧化应激损伤模型,MTT检测结果表明:杨梅树皮提取物在25-50μg/ml、杨梅果提取物浓度≥50 μg/ml具有明显的细胞保护活性,而杨梅叶提取物则无明显保护作用。流式细胞检测结果亦证明:杨梅树皮和杨梅果提取物均具有明显的抗细胞凋亡作用,而杨梅叶无明显抗细胞凋亡作用。相关氧化应激指标检测表明:杨梅树皮和杨梅果提取物能够显著地抑制H202引起的PC12细胞内ROS的增多和MDA的形成,并增加H202引起PC12细胞内SOD的降低。化学和细胞体外抗氧化活性评价均证明杨梅树皮具有良好的抗氧化作用。为深入了解杨梅树皮的化学成分,进一步寻找其活性物质,采用正相硅胶、Sephadex LH-20和制备液相等多种色谱方法从杨梅树皮醇提取物中分离得到14个化合物,并通过化合物的理化性质和UV、IR、NMR、MS等波谱数据进行结构鉴定,其中二苯基庚烷类化合物4个:3,5-二甲氧基-4-羟基杨梅醇,杨梅醇,杨梅酮,Myricanol 11-Sulfate;黄酮类化合物3个:杨梅苷,槲皮素,槲皮苷;三萜及甾醇类化合物7个:柽柳醇,熊果醇,熊果酸,蒲公英赛醇,杨梅萜二醇,β-谷甾醇,胡萝卜苷。其中化合物3,5-二甲氧基-4-羟基杨梅醇为新化合物,化合物柽柳醇、熊果醇为首次从该属植物中分离得到。对6个主要化合物(杨梅醇、杨梅酮、Myricanol 11-Sulfate、杨梅苷、槲皮素、槲皮苷)进行抗氧化应激活性筛选,分别采用H202和谷氨酸诱导的PC12细胞氧化应激损伤模型进行活性筛选,结果表明3个黄酮类化合物对两个模型均具有良好的细胞保护活性,以杨梅苷活性最强;而3个二苯基庚烷,只有化合物Myricanol 11-Sulfate因11位被磺酸基取代,具有较好的保护活性。流式细胞检测进一步证明化合物杨梅苷和Myricanol 11-Sulfate可部分逆转谷氨酸损伤导致的细胞凋亡;氧化应激相关指标的检测结果同样证明杨梅苷和Myricanol 11-Sulfate能够有效地抑制ROS的增多和MDA的形成同时增加细胞内SOD的含量。为了进一步阐明杨梅树皮、叶和果三个部位抗氧化活性的物质基础,采用UPLC-PDA、UPLC/QTof-MS结合主成分分析对三者的化学成分进行比较研究,结果表明树皮和叶中主要含有黄酮和二苯基庚烷类成分,果中主要含有黄酮和酚酸类成分;主成分分析(principle component analysis, PCA)表明,杨梅树皮与杨梅叶的化学组成相近,但杨梅果与二者化学成分组成相差较大。运用紫外可见分光光度法对杨梅树皮、叶和果中的总多酚、总黄酮含量进行测定,结果显示,三者总酚、总黄酮含量顺序:杨梅树皮>杨梅果>杨梅叶。综上所述,杨梅树皮、杨梅叶和杨梅果的总黄酮和总多酚含量与其抗氧化活性呈明显的正相关,黄酮和多酚类成分很可能是其抗氧化活性的物质基础。此外,本论文对杨梅属植物的化学成分和药理活性进行了综述,为本文的实验设计提供科学的参考依据。
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