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目的： 目的：本实验采用人工合成的Aβ25-35处理小鼠海马神经元（HT22细胞）24h作为AD模型，采用MTT法来检测细胞活力，同时运用RNAi技术干扰靶基因HMGB1的表达，研究干扰HMGB1对NF-κB信号转导通路的影响，来更深层次的讨论HMGB1在AD致病进程中的重要作用。 方法： 1、采用人工合成的Aβ25-35处理小鼠HT22细胞24h为AD模型，在倒置显微镜下观察细胞形态学的变化。采用MTT法来检测细胞活力，应用免疫印迹技术来检测细胞内HMGB1、NF-κB、RAGE、TLR4的表达情况，运用免疫荧光法来检测Aβ25-35损伤后HMGB1蛋白的位置改变。当siRNA转染进HT22细胞后，再运用免疫印迹技术检测中细胞中HMGB1蛋白的表达的改变。 2、取对数生长期的HT22细胞分为5组：正常细胞组（A组）、Aβ25-35模型组（B组）、siRNA组（C组）、siRNA+Aβ25-35损伤组（D组）、Aβ25-35损伤+转染试剂组（E组）。A组不做任何处理；B组加入终浓度为40μmol/L的Aβ25-35作用24h；C组加入50 nm现配的s iRN A和Ge nM ute转染复合物作用24 h；D组加入50 nm现配的siRNA和GenMute转染复合物作用24h后加入终浓度为40μmol/L的Aβ25-35处理24 h；E组加入GenMute转染试剂24 h后加入终浓度为40μmol/L的Aβ25-35处理24 h。从加药到收板作用48 h后提取蛋白进行细胞实验。运用免疫印迹法检测HMGB1、RAGE、TLR4及NF-κB蛋白的表达情况。 3、取对数期生长的HT22细胞分为3组：正常细胞组（A组）、Aβ25-35模型组（B组）、siRNA组（C组）。A组不做任何处理；B组加入终浓度为40μmol/L的Aβ25-35处理24 h；C组50 nm siRNA作用24 h后加入终浓度为40μmol/L的Aβ25-35处理24 h。运用酶联免疫吸附法（ELISA）法测上清液中IL-1β、TNF-α的表达。 结果： 结果：1、根据MTT法检测细胞活性确定Aβ25-35浓度为40μmol/L、作用时间为24h；Aβ25-35可引起HT22细胞毒性。Aβ25-35损伤组和正常组相比细胞活力下降（P＜0.05），HMGB1蛋白表达增高。细胞形态学观察 Aβ25-35损伤组细胞出现死亡，细胞间连接减少。 2、免疫荧光结果：Aβ25-35损伤后HMGB1蛋白的位置从核内部分释放至核外。 3、设计的4个序列都能明显抑制HMGB1的表达。相比于其他序列，821序列转染后抑制HMGB1的表达效率最高（P＜0.05）。 4、免疫印迹结果：① Aβ25-35损伤后，与A组相比，B组HMGB1、RAGE、TLR4及NF-κB蛋白表达均增加（P＜0.05）；② RNA干扰HMGB1后，与A组相比，C组HMGB1、RAGE、TLR4及NF-κB蛋白表达量明显下降（P＜0.05）；③与B组相比，D组HMGB1、RAGE、TLR4及NF-κB蛋白表达量明显下降（P＜0.05）；④与C组相比，D组HMGB1、RAGE、TLR4及NF-κB蛋白表达量增加（P＜0.05）；⑤与B组相比，E组细胞内HMGB1、RAGE、TLR4及NF-κB蛋白表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。 5、酶联免疫吸附法（ELISA）结果：① Aβ25-35损伤后，与A组相比，B组培养基中细胞分泌的炎症因子 IL-1β、TNF-α表达增多（P＜0.05）。②与 B组相比，C组培养基中细胞分泌的炎症因子中 IL-1β、TNF-α的表达明显下降（P＜0.05）。. 结论： Aβ25-35可引起 HT22细胞毒性并可引起 HMGB1核内向核外释放。RNA干扰HMGB1可成功抑制 HMGB1的表达。在Aβ25-35损伤HT22细胞中，RNA干扰HMGB1可减少Aβ25-35引起的细胞损伤，降低HMGB1及下游TLR4、RAGE、N F-κB的表达及炎症因子IL-1β、TN F-α分泌。