目的:珍黄养颜胶囊为新研发的复方制剂产品,具有补充气血、滋养肌肤、改善面部黄褐斑等功效。本研究拟通过对珍黄养颜胶囊的质量控制方法进行研究,建立有效、稳定、可控的定性、定量分析方法,为本品质量标准的制定提供参考依据。此外,还对本品进行大鼠长期毒性试验研究,确定其临床安全用药剂量,为其临床用药提供安全性依据。方法:(1)采用显微鉴别方法对本胶囊中的茯苓、艾叶等十一味药材进行鉴别。(2)利用TLC法对本胶囊中的熟地黄、川芎、当归、丹参等七味药材进行定性鉴别。(3)采用HPLC法同时测定本品中芍药苷和丹皮酚的含量,其色谱条件如下:色谱柱为Luna C18 100A(250mm×4.6mm,5um),流动相为乙腈-0.05%磷酸,梯度洗脱,检测波长为230nm,流速1.00mL/min,柱温35℃,进样量10ul;并对其进行方法学考察。(4)参考《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》,建立本品的HPLC指纹图谱,其色谱条件如下:色谱柱为Luna C18 100A(250mm×4.6mm,5um),流动相为乙腈-0.05%磷酸,采用梯度洗脱法,检测波长228nm,流速0.8mL/min,柱温35℃,进样量10ul;并对该方法进行方法学考察和采用相似系数法、夹角余弦法和2004 A中药色谱指纹图谱相似度评价软件对10批珍黄养颜胶囊指纹图谱相似度进行了评价。(5)连续180 d对大鼠灌胃给药本品2.93、1.47、0.74 g(生药).kg-1三个剂量并设置对照组,观察给药90 d、180 d后的毒性反应及停药30 d期间的恢复情况。结果:(1)建立了珍黄养颜胶囊中茯苓、艾叶等十一味药材的显微鉴别方法,其显微特征性均较强,对本品具有鉴别意义。(2)本研究中建立的川芎、当归、丹参等七味药材的TLC鉴别方法,其TLC色谱图:斑点均较清晰,在各供试品与对照品或对照药材相同的位置上显相同颜色斑点,且阴性对照均无干扰。(3)HPLC法测定芍药苷和丹皮酚的含量:芍药苷和丹皮酚分别在0.144ug~1.44ug和0.0316~0.316ug间具有较好的线性关系,r分别为0.9997和0.9998,精密度、稳定性、重复性和加样回收率的RSD值均<3%。同时初步拟定本品每粒胶囊中含芍药苷(C23H28O11)不得少于1.0965mg;每粒胶囊含丹皮酚(C9H10O3)不得少于0.2665mg。(4)建立珍黄养颜胶囊的HPLC指纹图谱:以橙皮苷峰为参照峰,生成珍黄养颜胶囊对照指纹图谱共有模式,确定了36个共有峰,并通过与对照品峰的比对,确认了其中的5个共有峰成分;方法学考察中,除了重复性试验中个别共有峰的相对峰面积RSD值小于3.5%外,精密度、稳定性、重复性试验的各共有峰的相对保留时间及相对峰面积比值RSD值均小于3%,与对照图谱比,各批供试品的指纹图谱相似度均>0.9。(5)与对照组相比,给药90 d后,高剂量组大鼠的摄食量减少;高、中剂量组大鼠的体重增长均较缓慢;高剂量雌性组肾脏指数略升高,肺脏、胸腺指数稍降低。给药180 d后,高、中剂量组血小板、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶升高,平均红细胞体积降低。停药30 d后,高、中剂量组平均红细胞体积值降低,高剂量组血小板值升高;上述部分指标恢复正常。结论:(1)本研究建立的显微鉴别、薄层色谱法、高效液相色谱法和指纹图谱分析方法专属性强、重复性较好,为珍黄养颜胶囊的质量控制提供了科学依据。(2)珍黄养颜胶囊0.74 g.kg-1剂量组大鼠各项检查均未见明显毒性反应,提示本品的长期安全用药剂量应低于0.74 g.kg-1。