隆线溞线粒体基因组序列的测定与分析

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隆线溞(Daphnia carinata)为节肢动物门(Arthropoda)、甲壳纲(Crustacea)、鳃足亚纲(Branchiapoda)、枝角目(Clasocera)、溞科(Daphniidae)动物,在淡水生态系统中占有重要位置,绝大多数生活于池塘、湖泊以及江河中。溞属动物物种形态鉴定标准仍存在许多模糊不清之处,利用分子生物学手段可有效重估不同溞属动物形态型的分类地位,并揭示形态相似种群的真正变异。本文旨在测定隆线溞线粒体基因组序列,分析其基因组成和结构特征,进而为研究溞属动物的分子系统进化提供依据。本研究采用LA-PCR和普通PCR方法,获得隆线溞线粒体基因组序列,并对序列进行了组装和注释,拼接后得到了14747bp的隆线溞mtDNA序列。这段序列A、T、G、C碱基的含量分别为33.8%、36.5%、14.4%、15.3%, GC-Skew值为-0.009,AT-Skew值为-0.027。通过序列同源性和结构分析,鉴定了36个基因,包括13个蛋白编码基因、21个tRNA基因和2个rRNA,推测到未能扩增到的基因包括tRNAIle、tRNAMet以及控制区。在13个蛋白质编码基因中,起始密码子包括ATA(ND5)、ATG(COII、ATP6、COIII、ND4、CYTB、ND1、ND2)、ATT(ND3、ND4L、ND6)、GTG(ATP8)和一个特殊的ACTA(COI),终止密码子包括TAA(ATP6、ND4L、ND6、ND1)、TAG(ATP8、COIII、ND3、CYTB)和四个不完整终止密码子T(COI、COII、ND5、ND4)。在预测的21个tRNA基因的二级结构中,除了tRNA-SerGCU缺少D臂之外,其余的均可形成典型的三叶草结构。所有预测的二级结构中共出现2处U-C错配,1处A-A错配和1处U-U错配。36个基因中,蛋白质编码基因ND2、COI、COII、ATP8、ATP6、COIII、ND3、ND6和CYTB,以及tRNAMet、tRNATrp、tRNALeu2、tRNALys、tRNAAsp、tRNAAla、TrnaGly、tRNAAla、tRNAArg、TrnaAsn、tRNASer1、TrnaGlu、tRNAThr和tRNASer2基因位于H链,其余基因则位于L链。基于COI基因DNA或氨基酸序列进行了同源性、进化分歧及密码子使用偏向性等方面的比较,分析结果和采用不同方法构建的分子系统进化树均显示:中国来源的两种溞属动物——隆线溞与大型溞亲缘关系较近,显示出与形态学分类结果的一致性;但长期的地理位置隔离可能增加了形态相似但来源不同(北美与中国)同种蚤状溞(Daphnia pulex)的种内遗传距离。
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