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目的:牙周炎是口腔临床上最常见的疾病之一,其发病因素复杂,其中主要的致病因素是菌斑微生物及其产物,该病也是导致人类失牙的最主要口腔疾病。虽然牙周洁治术、根面平整术等机械治疗方法是目前临床治疗牙周病的主要手段,但对于某些程度的牙周疾病,药物治疗具有不可或缺的辅助作用。牙周炎的药物治疗分为全身给药和牙周局部给药,与全身给药相比,局部给药可提高局部药物浓度、减少剂量和延长作用时间,同时也避免因全身用药可能的不良反应,并提高患者的依从性,因此牙周局部给药是牙周炎药物辅助治疗的首选。然而,有研究表明常用的临床局部药物米诺环素软膏在牙周袋内的释放速度不稳定,通常在置入袋内2-3 d内释放量达80%,这导致牙周袋内的药物浓度波动显著增大,这种释放情况不利于牙周感染的控制,可能会阻碍牙周组织的修复再生。因此,有必要选择一个合适的载体来承载盐酸米诺环素以控制其在牙周的局部释放。该载体应该具有良好的生物相容性、良好的载药能力并且能稳定释放。变性溶菌酶(PTL)被广泛应用于许多研究和开发大分子载体材料,本课题组选用变性溶菌酶(PTL)来作为承载盐酸米诺环素药物的载体,因其纳米球具有合适的释放特性和制备简单的特点,因此变性溶菌酶(PTL)是一种有前途的载体材料。内容:含有盐酸米诺环素的溶菌酶在加入TCEP后,在处理后的牙根片样品表面形成一层包裹有盐酸米诺环素的纳米膜结构,通过对加载药物的牙根片样品进行缓释药物能力的检测和生物相容性的检测,筛选出最适宜浓度进行后续体外抗菌实验和大鼠体内牙周炎模型的实验。方法:1.牙根片的制备因严重牙周炎或矫正减数拔除的前磨牙被收集作为实验备用,由天津医科大学口腔医院口腔外科经病人同意后提供。在流水冷却下,慢速切割机工作头与牙长轴垂直,在釉牙骨质界处切割,制备出单个牙根,每块牙根片依次用400粒度、600力粒度、800粒度、1000粒度和1200粒度的水砂纸打磨,打磨完成后获得7mm×5mm×4mm的牙根片样本。2.PTL/MINO的制备及表征吸取lyz和MINO的混合液与TCEP溶液在PH为6.2下以1:1的体积混合以形成PTL/MINO纳米膜结构。利用透射电镜观察制备好的包含盐酸米诺环素的PTL纳米膜结构;利用X射线电子能谱、Th T染色、表面能测定仪等仪器对纯牙根片、制备好的PTL、PTL/MINO牙根片的形貌、性质和元素成分进行观察和分析;应用红外光谱验证PTL/MINO内是否包载有盐酸米诺环素。3.PTL/MINO的药物缓释能力在PBS缓冲液中测定1-7天加载不同浓度盐酸米诺环素PTL纳米膜结构牙根片样本的药物释放能力。4.PTL/MINO的生物相容性用成纤维细胞对各组不同牙根片样本的生物相容性进行评价,和筛选最合适的浓度进行后续实验的结果。5.PTL/MINO抑菌性能分析应用平板菌落计数法和抑菌环大小法评价加载米诺环素的致密膜结构对金葡萄球菌和牙龈卟啉单胞菌的体外抗菌效果。6.PTL/MINO在体内研究分析在牙周炎模型构建成功后,将实验组、对照组和空白组的溶液连续一个月以一周一次的的频率注射至牙周袋内的牙根面上,一个月后取颌骨材料进行microct扫描、龈沟液进行炎症因子检测及牙龈组织HE染色处理,对样品的抗炎能力进行研究分析。7.数据分析使用SPSS软件进行统计学分析。采用单因素方差分析,t检验来评估各组之间的差异。显著性水平P<0.05。结果:1.PTL/MINO结构表征结果透射电镜下观察到PTL-MINO纳米颗粒均匀分布,边缘不平整,少许成短链状,平均直径约20-25nm;XPS、Th T染色结果表面牙根片表面负载的PTL及PTL-MINO均有致密膜状结构;表面能实验证实了薄膜加载成功的同时也证实了材料经过改性后具有了与牙根片更好结合力。2.PTL/MINO较好的缓释能力PTL/MINO在1到7天的缓释目标药物的能力与加入的药物的体积量成正比。3.PTL/MINO有抑菌活性通过平板菌落计数实验和抑菌环结果表明加载米诺环素的纳米膜状结构可以有效抑制金葡萄球菌菌和牙龈卟啉单胞菌的活性。4.PTL/MINO生物相容性在对不同材料表面的成纤维细胞的增殖和分化能力的分析中,较低浓度的样品组(药物浓度1mg/ml)促进细胞增殖的作用强,遂后续实验中均采用该浓度。5.PTL/MINO牙周炎的体内结果在大鼠牙周炎的体内研究中,通过对PTL/MINO组、单纯PTL组、仅含有MINO组及空白组的牙龈组织染色分析、龈沟液炎症因子的检测和牙周袋的测量结果表明,PTL/MINO处理组炎症反应更轻、骨质修复更好。结论:本研究所制备的PTL/MINO纳米膜结构能够达到缓慢释放目标药物的目的,并且有良好的生物相容性,有利于成纤维细胞的增殖,能减轻牙周炎的炎症反应,同时对周围骨质有修复效果。