近年来,阿尔兹海默症、帕金森等中枢神经系统疾病的发病率一直居高不下,严重危害到人们的健康。伴随着疾病的治疗,后加工的化学合成药物对人体的副作用也不容忽视,因此,加工少、低副作用的天然保健型药物越来越受人们青睐。蜂王浆就是这样一种历史悠久、药食同源的天然保健品,它的药物功效具有广谱性,连续服用蜂王浆可提高机体免疫力、降压降脂、促进新陈代谢,在心脑血管疾病甚至是抗肿瘤方面都有很好的疗效。然而,蜂王浆的品质（主要是新鲜度）直接影响到其药理功效,需建立一个准确的标准来评价蜂王浆的品质。本实验研究旨在寻求评价蜂王浆品质的新指标—外泌体,并将蜂王浆来源的外泌体作用到体外血脑屏障模型中,为其对血脑屏障通透性的作用趋势做一个初步的探索。本实验的主要研究内容有四个部分,分别为1)蜂王浆来源的外泌体的提取、鉴定以及定量;2)采用CCK-8法测定外泌体对人脐静脉细胞系ECV 304在正常态、AAPH模拟脑缺氧损伤后的作用情况,以及外泌体对ECV 304的预保护作用;3)原代星型胶质细胞AST经培养、纯化后,采用CCK-8法测定外泌体对原代AST在正常态、AAPH模拟脑缺血损伤后的作用情况,以及外泌体对原代AST的预保护作用;4)使用ECV 304和原代AST共建体外血脑屏障模型,通过紧密连接蛋白ZO-1的免疫荧光染色来评价外泌体对体外血脑屏障模型通透性的影响。实验研究结果表明:1)使用沉淀法从蜂王浆中提取的外泌体在透射电镜下观察形态完整,具有典型的半球形、茶托样囊泡结构。纳米粒子跟踪分析显示外泌体直径大约为149.3nm,纯度达到99.2%以上。并且,外泌体标志性蛋白CD63、CD81均有较高丰度的表达。纳米跟踪分析的颗粒浓度和BCA法定量的外泌体蛋白浓度的结果都显示蜂王浆中外泌体的含量较高。2)ECV 304经CD31、CD105免疫荧光标记后,细胞纯度达100%。外泌体作用于正常ECV 304,随着外泌体浓度的增加,对细胞的促增殖作用越明显。经AAPH模拟脑缺氧诱导细胞损伤后,随着外泌体给药浓度的增加,对细胞活力的逆转作用越明显。在外泌体预给药作用后,再用AAPH损伤细胞,结果显示外泌体对细胞的保护作用随着给药浓度的升高而增强。3)取自SD大鼠的原代AST经培养、纯化后,经GFAP免疫荧光标记后,纯度在95%以上。外泌体作用于正常原代AST,随着外泌体浓度的增加,对细胞的促增殖作用越明显。经AAPH模拟脑缺血诱导原代AST损伤后,随着外泌体给药浓度的增加,中浓度组对细胞活力的逆转作用最明显,高浓度组对细胞增殖有一定的抑制作用。在外泌体预给药作用后,再用AAPH损伤细胞,结果显示外泌体对原代AST的保护作用也随着给药浓度的升高而增强。4)通过EVOM2跨膜电阻仪测定体外血脑屏障模型的TEER值,结果显示ECV和原代AST共建的体外模型的TEER值高于单层细胞模型组,说明两种细胞共建的体外血脑屏障模型的通透性最低、屏障功能更完整。在外泌体作用于正常模型组、AAPH模拟脑缺氧、缺血诱导的损伤组后,使用ZO-1免疫荧光标记各模型组的紧密连接蛋白。结果显示,分别与对照组相比,外泌体作用过的模型组中ZO-1的表达水平较高,且排列结构更紧密、规整些。同样,体外血脑屏障模型经外泌体预作用后再用AAPH诱导损伤后,与对照组相比,外泌体给药组的ZO-1的表达量高些,且紧密结构被破坏的程度也轻些。这些结果揭示一定浓度的外泌体对血脑屏障单元具有保护作用,可增强体外血脑屏障模型的紧密连接,降低其屏障通透性,提高屏障功能完整性,对维持体外血脑屏障模型的紧密结构、屏障功能有一定的积极作用。综上所述,本实验研究表明,蜂王浆含有较为丰富的外泌体,为蜂王浆的品质评价标准提供了一个潜在新指标。从药物功效上看,蜂王浆来源的外泌体可降低体外血脑屏障模型的通透性,对血脑屏障单元具有积极作用,使蜂王浆来源的外泌体有可能成为应用到脑血管疾病预防、治疗、预后等方面的潜在高效药物。