有关果蝇幼虫的神经元和神经环路的研究基本上都是在固定或解剖的幼虫中进行,但是行为过程中的活体幼虫中的神经元发放到底是什么样子的呢,要想知道幼虫行为过程中的神经元发放情况,就需要实时监测自由运动中幼虫的神经元活跃情况。为此,我们搭建了一套基于高斯激光束的双侧照明光片显微镜系统,光损伤小,时间分辨率最高可达50 Hz。另外,我们还设计了一定规格的微流控芯片,来限制幼虫在z轴上下的运动。采用30μm厚度的光片,我们成功实现了对运动中幼虫VNC的神经元活性钙成像信号的记录。我们探索了一龄幼虫PMSIs神经元在前进蠕动中的神经元发放规律,同时记录了PMSIs的神经活动信号和身体体节的收缩,发现在前进蠕动时,PMSIs神经元从后往前顺序性发放,并且和对应体节的收缩高度一致。有趣的是,我们还发现了一个新现象,当前进蠕动波到达A1体节时,PMSIs神经元还可能会发起从前往后顺序性发放的反向波,这在之前的研究中从未报道过。双侧照明光片成像系统的建立为之后探究活体自由运动的果蝇幼虫的在体神经元功能成像奠定了基础。