流感病毒是引起呼吸道感染的重要致病原之一,甲型流感病毒感染是全球流感发病及死亡的主要原因,因此对甲型流感病毒的研究具有重要意义。目前防治流感病毒感染的方法有抗病毒药物和流感疫苗。然而流感的高频变异限制了疫苗的保护时效,且流感病毒对现有的药物产生了较为严重的耐药性,因此,开发新的抗流感药物是全球所面临的共同问题。本研究以流感荧光素酶报告病毒为基础,构建了抗流感药物的筛选和评价体系,并以中药为对象进行了抗流感活性筛选研究。本论文共有四章:第一章综述。本章对流感病毒的生物学特征及其预防及治疗,以及中药抗流感应用的现状及优势等方面进行了综述。第二章流感荧光素酶报告病毒的拯救和评价。本章对一株流感荧光素酶报告病毒PR8-NS1-Gluc进行了研究。实验证明该重组病毒在体外细胞中具有复制能力,在小鼠体内具有感染力和致病性,且荧光素酶的表达量与病毒载量呈正相关,提示荧光素酶检测法能够为病毒在细胞或小鼠肺组织中的复制提供一种简便的方法。利巴韦林和磷酸奥司他韦处理病毒感染的细胞和动物,能够有效抑制荧光素酶的表达,且该抑制呈剂量依赖的特点,表明该病毒能够用于抗流感药物的筛选和评估。本研究为抗病毒药物的评价提供了一种新的定量方法。第三章中药抗流感活性筛选研究。以上述(第二章)流感荧光素酶报告病毒为基础,我们进一步建立了抗流感活性成分筛选体系,并针对352种单味中药进行了筛选研究。12种中药具有抗流感活性,其中8种中药的选择指数>20。我们对具有抗流感活性的中药诃子和藏青果的15种单体成分进行活性筛选,筛选出诃子酸和诃黎勒酸具有较好的抗流感活性。综合单周期感染抑制实验、病毒释放抑制实验以及神经氨酸酶抑制实验等对诃子酸和诃黎勒酸进行作用机制的研究。最后,验证诃子酸和诃黎勒酸对耐达菲株流感病毒A/H1N1pdm(09)、野生型H1N1和野生型H3N2病毒的抑制效果。第四章讨论和展望。本章总结了本人硕士论文的研究工作,提出了今后的研究方向。本课题从体内和体外对流感荧光素酶报告病毒PR8-NS1-Gluc进行了评价,并以之为基础构建了抗流感活性药物的筛选和评价体系。进一步的,本课题对352种单味中药进行了抗流感活性筛选,成功筛选出8种具有较高抗流感活性的中药,并筛选出了8种中药中抑制效果较好的中药诃子和藏青果的共有活性单体—诃子酸和诃黎勒酸。本课题基于流感荧光素酶报告病毒所建立的抗流感活性筛选和评价体系对于中药抗流感的研究和开发具有重要的意义,而筛选所得具有抗流感活性的8种单味中药其药效物质的进一步分离和鉴定也是有趣的研究方向。