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亲环蛋白(cyclophilin,CyP)家族是一类广泛存在于原核和真核生物体内,并在结构上高度保守的多功能蛋白质。该家族属于具有催化含脯氨酸的寡肽底物顺反异构作用的肽脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolylcis-transisomerases,PPIase)。CyP通过催化含肽脯氨酰的顺反异构而帮助蛋白质折叠和组装。此外,CyP还起着分子伴侣的作用,在应激反应中参与调节信号转导途径,并影响RNA的剪接过程。自最初CyP作为免疫抑制剂环孢素A(cyclosporinA,CsA)的细胞受体被发现以来,目前大约有130种CyP同源异构体被发现和克隆。CyP家族各成员间不仅分子量不同,而且在细胞分布及功能上也存在着差异。解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)是研究最广泛的非常规酵母之一。它能以含脂肪或蛋白质的物质作为碳源生产甲烷。在有氧的情况下,它能利用烷烃类化合物、油脂、葡萄糖等生产柠檬酸。因此,解脂耶氏酵母菌株很容易从奶制品或香肠中分离,也很容易从油田中分离。解脂耶氏酵母对人没有致病力。
研究表明,在解脂耶氏酵母中含有13个CyP基因,它们分布于不同染色体上,本文选取其中1个CyP基因(GenBank登录号:YA130C15653p)为研究对象。生物信息学分析表明该cya含638个氨基酸,分子量约为71Kda,pI值为5.59,可能存在于细胞质中。该蛋白含2个功能结构域(WD40和cyclophilin),虽然与人类CyPA相似度仅为44.8%,但决定CyP结构和功能的氨基酸残基都高度保守。三维结构分析表明,解脂耶氏酵母cyclophilin的三维结构与人类CyPA的大致相同。RT-PCR分析显示CyP的表达与预期结果一致。
本文成功构建了该CyP基因的打靶载体,这为进一步研究该基因的功能奠定了基础。