目的:1.通过跟师学习,对高天舒教授应用瘿宁合剂治疗各类结节性甲状腺肿临床病例进行分析、整理,总结高天舒教授对结节性甲状腺肿治疗的用药规律以及富碘中药复方瘿宁合剂的临床使用方法,进一步探讨导师对结节性甲状腺肿的学术思想,临床经验,以及富碘中药复方的作用及如何化裁灵活应用,旨在为临床治疗结节性甲状腺肿提供良好的思路。2.测定富碘中药及其瘿宁合剂中碘元素含量,分析测定过程中的影响因素。3.比较瘿宁合剂与碘过量对结节性甲状腺肿模型大鼠机体内碘代谢分布及甲状腺滤泡上皮细胞NIS蛋白表达,进而明确瘿宁合剂治疗结节性甲状腺肿疗效机制。材料与方法:1.通过跟随导师临床实践,总结临床所见各类病例,进行归纳、分析与总结。阅读大量文献,对导师高天舒教授学术思想进行提炼,将高天舒教授在结节性甲状腺肿的诊治过程中的经验、观点与学术思想进行整理分析。2.原理为砷铈催化分光光度法。配置碘浓度分别为200、400、600、800、1000、1200μg/L的标准系列溶液,分别取标准溶液加入硫酸锌、碳酸钾、氯化钠以及氯酸钾混合碱性辅助剂,样品灰化2h,将灰分溶于去离子水中,取上清液后用砷铈催化分光光度法测定碘含量。根据C(碘含量)与A(光密度值)之间的线性关系计算碘含量,每个样品测定3次,取平均值,进行标准曲线建立。建立标准曲线后,以海藻、海带、昆布为富碘中药饮片代表,进行最佳灰化温度选择与回收实验,选择出最佳检测条件,测定常见中药碘含量。分别对不同煎煮时间的富碘中药复方进行测定,绘制煎剂中碘含量与煎煮时间曲线,选择最佳煎煮时间。在最佳煎煮时间下测定中复方与实验用缩中药复方煎剂碘含量。分别在200℃、300℃、400℃、500℃和600℃碱灰化条件下测定海藻碘含量,选择出最佳灰化条件。3.选取SPF级SD大鼠62只,雌雄各半。适应性饲养一周后随机选取10只为NG,其余52只予以PTU灌胃,剂量为1mg/100g大鼠,灌胃14天后随机选取2只大鼠进行模型验证。模型复制成功后将50只大鼠随机分为5组,分别为模型组(MG)10只、瘿宁1号组(Y1G)10只、消瘿2号组(Y2G)10只、富碘中药组(HG)10只、碘剂组(IG)10只。NG与MG分别予以生理盐水3ml每日灌胃,瘿宁1号组予以消瘿1号浓缩煎剂3ml、消瘿2号组予以消瘿2号浓缩煎剂3ml、HG予以予以富碘中药浓缩煎剂3ml、IG予以碘酸钾溶液3ml灌胃,连续灌胃28天。于27天时将大鼠放入代谢笼中,收集大鼠24小时尿、粪。干预结束后予以腹腔麻醉处死大鼠,取大鼠动脉血、甲状腺组织。采用碱灰化砷铈分光光度法对大鼠血清、尿液、粪便、甲状腺组织碘含量进行测定,采用放免法对大鼠血清T3、T4、TSH进行检测,HE染色法对大鼠甲状腺形态学进行观察,采用Western Blotting法对大鼠甲状腺内NIS蛋白进行测定,采用免疫组化法与荧光免疫组化对大鼠甲状腺滤泡上皮NIS蛋白表达进行测定。结果:1.痰凝、气滞、血瘀为本病的病理因素,行气、活血、化痰为本病的治疗大法。甲状腺功能正常,抗体正常的结节性甲状腺肿患者,辨证方法则需辩虚实。导师认为结节性甲状腺肿初期当属实证,继则中期虚实夹杂,病情日久,迁延不愈,后期转为虚侯。导师导师擅长应用富碘中药复方瘿宁合剂1号进行辨证论治。结节性甲状腺肿伴甲状腺功能亢进或亚临床甲亢患者,导师建议富碘中药应慎用或短暂使用,长时间使用则会影响甲状腺功能恢复。导师临床对本病进行辨气、辨血、辨痰。临床使用瘿宁合剂2号进行辨证论治。结节性甲状腺肿伴甲状腺功能减退或亚临床甲减患者导师建议不采用富碘中药治疗,以防富碘中药中的高剂量碘剂对甲状腺产生抑制作用。临床进行分期辨证论治,且提出本病好发于女性,临床则使用瘿宁合剂2号合补中益气汤加减应用。高危结节或甲状腺术后结节导师认为痰、瘀为主要因素,临床以瘿宁合剂2号加减治疗。2.最佳灰化温度为:300℃;标准曲线回归方程A=-6.91×10-3C+1.0306,其相关系数r=0.9993;海藻碘含量0.829mg/g,昆布碘含量0.343mg/g,海带碘含量0.864mg/g;灰化前回收率分别为海藻83.19%、海带81.47%、昆布80.32%;灰化后回收率分别为海藻91.24%、海带93.43%、昆布95.86%。中药复方最佳煎煮时间为2小时。瘿宁合剂1号碘含量:45.798mg/L,瘿宁合剂2号碘含量:0.944mg/L,富碘中药碘含量:43.778mg/L;浓缩瘿宁合剂1号碘含量:90.729mg/L,浓缩瘿宁合剂2号碘含量:1.798mg/L,浓缩富碘中药碘含量:88.871mg/L。3.(1)经PTU灌胃14天后肉眼观察正常组甲状腺大多呈淡粉色,质地柔软;MG甲状腺呈现暗红色,明显充血肿大,甲状腺组织有一定韧度。光镜下观察甲状腺滤泡于正常组相比明显大小不等,滤泡腔变小,形状不规则,腔内胶质明显减少,单层立方上皮细胞增生肥大成复层,部分滤泡融合形成巨滤泡,滤泡腔与间质可见大量的炎性细胞侵润,可见小部分滤泡增生,形成闭合无腔的细胞团,滤泡周围血管丰富,提示甲状腺肿模型复制成功。(2)各组大鼠体重变化趋势一致,第2周与NG相比,MG、Y1 G、Y2 G、HG与IG大鼠体重较低,P<0.05。与IG相比,Y1 G、瘿宁合剂2号第5周、第6周体重较高P<0.05,Y1 G与瘿宁合剂2号之间无统计学差异,P>0.05。(3)甲状腺相对重量比较,与NG相比,MG、Y2 G、HG与IG甲状腺相对重量较高,P<0.05;与MG比较,Y1 G、Y2 G、HG与IG甲状腺相对重量较低,P<0.05;与NG比较,Y1 G甲状腺重量无统计学差异,P>0.05。(4)血清碘含量比较中,与NG相比,Y1 G、Y2 G、HG与IG碘含量明显升高P<0.05;与IG相比,Y1 G、Y2 G、HG血清碘含量较低,P<0.05;与Y2 G比较,Y1 G、HG碘含量较高,P<0.05;尿碘含量比较中,与NG相比,Y1 G、Y2 G、HG与IG碘含量明显升高,P<0.05;与IG相比,Y1 G、HG尿碘含量较高,Y2 G尿碘含量较低,P<0.05;与HG相比,Y1 G尿碘含量较高,P<0.05。粪碘含量比较中,与NG相比,Y1 G、HG与IG碘含量较高,P<0.05;与Y2 G比较,Y1 G、HG与IG碘含量较高,P<0.05;甲状腺中碘含量比较,与NG比较,Y1 G、Y2G、HG及IG甲状腺中碘含量较高,MG含量较低,P<0.05;与IG比较,Y1 G、Y2 G、HG甲状腺内碘含量较高,P<0.05;与Y2 G比较,中药复方1号与HG甲状腺内碘含量较高,P<0.05;与HG比较,Y1 G甲状腺内碘含量较高,P<0.05。(5)各组甲状腺形态学比较:NG:甲状腺滤泡呈中等大小,上皮细胞呈立方或扁平状,滤泡腔内充满丰富的胶质;MG:近90%的滤泡腔消失,滤泡上皮细胞明显增高变形,80%的滤泡上皮扁平,可见小部分滤泡增生,形成闭合无腔的细胞团滤泡周围血管丰富;Y1 G:状腺滤泡恢复中等大小,上皮细胞呈立方或扁平状,滤泡腔内充满丰富的胶质,偶而见到间质中的炎性细胞,基本恢复正常;Y2 G:甲状腺滤泡与上皮细胞恢复较好,形态较为规则,仍可见滤泡腔与间质侵润的炎性细胞;HG:甲状腺滤泡与上皮细胞恢复较好,但仍可见滤泡腔与间质侵润的炎性细胞;IG:甲状腺滤泡上皮细胞部分恢复,但是仍有部分滤泡融合形成巨滤泡,仍可见滤泡腔与间质侵润的炎性细胞。(6)各组大鼠甲状腺功能比较:TT3比较中,与NG比较,MG与Y2 GTT3含量较低,IGTT3含量较高,P<0.05;NG、中药复方1号以及HG之间比较无统计学差异,P>0.05。TT4比较中,与NG比较,MG与Y2 GTT4含量较低,IGTT4含量较高,P<0.05;与Y2 G比较,Y1 G、HG以及IGTT4含量较高,P<0.05。与IG比较,中药复方1号与HGTT4含量较低,P<0.05,与HG比较,Y1 GTT4含量较低,P<0.05。Y1 G与NGTT4含量比较无明显差异,P>0.05;Tsh比较中,与NG相比MG、Y2 GTsh含量较高,P<0.05。NG、Y1 G、HG以及IGTsh含量比较无统计学差异,P>0.05。(7)与NG比较,Y1 G、HG、Y2 G及IGOD值较高,MGOD值较低,P<0.05;与IG比较,Y1 G与HGOD值较高,P<0.05,Y2 GOD值则与IG无统计学差异,P>0.05;与Y2 G比较,Y1 G与HGOD值较高,P<0.05;与HG比较,Y1 GOD值较高,P<0.05。(8)甲状腺内NIS蛋白表达免疫组化阳性表达面积结果中,与NG比较,Y1 G、Y2 G、HG及IG面积较大,MG面积较小,P<0.05。与IG比较,Y1 G与HG表达面积较大,Y2 G表达面积较小,P<0.05。与HG比较,Y1 G表达面积较大,P<0.05(9)根据各组荧光表达,NIS荧光表达从强到弱依次为:Y1G>HG>IG>Y2 G>NG>MG。结论:1.治疗结节性甲状腺肿应结合患者的甲状腺功能、抗体水平,辨证使用富碘中药。2.本实验改良了对中药饮片进行碘含量的检测方法,经回收实验验证,本实验方法准确,重复性较高。证明富碘中药煎煮过程的最佳时间,最佳灰化温度,进一步明确了富碘中药及常用软坚散结中药碘含量及瘿宁合剂煎剂碘含量。3.与碘过量短期比较,瘿宁合剂能够增加碘缺乏机体甲状腺内碘含量,但却未造成碘甲亢。形态学比较中,瘿宁合剂对甲状腺肿恢复较好。