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目的: 探索电针(EA)足三里穴(ST36)在大鼠脑缺血再灌注(CI/R)中的脑缺血耐受作用及研究其可能机制,并且探索电针(EA)百会穴(GV20)是否改善大鼠炎性痛(CFA)中的痛觉过敏,从而通过比较两个穴位在两种大鼠模型中的疗效初步说明穴位特异性的问题。 方法: (1)在CI/R模型中,将实验分为假手术组(sham),大脑中动脉栓塞模型组(MCAO),电针预处理百会穴加MCAO组(EA GV20),电针预处理足三里加MCAO组(EAST36),ST36不予以电针刺激(SE)。大脑中动脉栓塞(middle cerebral arteryocclusion,MCAO)模型即前段烧成圆头的4-0尼龙线栓自大鼠颈外动脉(ECA)插入,经颈总动脉(CCA)交叉处调节角度置入颈内动脉(ICA),圆头直至大脑中动脉分叉处,缺血120 min后,拔除线栓恢复再灌注24 h;假手术组予以相同手术操作,但线栓不插入大脑中动脉;电针组在造模前120 min分别在百会穴(GV20)和足三里(ST36)予以电针刺激(1mA,2/15Hz,持续时间30 min),然后造MCAO模型;假电针组在造模前120min扎针于足三里但不予以电刺激。利用longa评分观察大鼠行为学改变,利用2% triphenyltetrazolium chloride(TTC)观察脑梗死体积,利用蛋白印迹法(WB)检测海马凋亡蛋白bc1-2和bax的表达情况,利用实时荧光定量PCR观察皮层炎症因子的转录情况,利用氧化应激试剂盒检测皮层SOD(superoxidedismutase)和MDA(malondialdehyde)水平。 (2)在CFA模型中,将实验分为生理盐水组(Sal),完全弗氏佐剂组(CFA),电针足三里加CFA组(EA ST36),电针百会穴加CFA组(EA GV20),GV20不予以电针刺激(SE)。CFA组即将100 ul完全弗氏佐剂注射入大鼠右后足趾皮下制各小鼠炎症性痛模型(n=8),以注100μ l生理盐水作为对照。电针组在造模后立即予以电针(1mA,2/15Hz,持续时间30 min),第90 min予以第二次电针,分别作用于百会穴(GV20)和足三里(ST36)。假电针组扎针于百会穴处但不予以电刺激。利用机械阂值(mechanical withdrawal threshold MWT)和热阈值(thermal withdrawal latency TWL)检测大鼠行为学改变,主要记录造模前和造模后150 min大鼠抬腿时间和抬腿力度。此外,利用fos免疫荧光技术观察脊髓背角疼痛信号的神经元标记。 结果: (1)相对与sham组,MCAO组表现出明显的行为学缺陷和严重的脑梗死,增加MDA含量、bax蛋白和促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-a)的转录水平(##P<0.01),减少SOD活性和bcl-2蛋白(##P<0.01),然而,电针预处理均能够明显减轻MCAO所产生的损害如减少行为学评分(*P<0.05)和脑梗死体积(**P<0.01),减少bax蛋白(**P<0.01)、MDA含量(*P<0.05)以及各种炎症因子的转录水平,增加bcl-2蛋白(*P<0.05)和SOD活性(**P<0.01),而SE没有产生相应的作用。此外电针预处理5T36和GV20相比,两者之间均没有统计学意义。 (2)予以CFA之前,各组之间MWT和TWL行为学表现没有统计学差异(P>0.05)。给予CFA后150 min,CFA组的MWT和TWL明显降低相对于Sal组(##P<0.01),而脊髓背角同侧fos表达在浅层(laminaeⅠ-Ⅱ;##P<0.01)以及深层(laminaeⅢ-Ⅴ;#P<0.05)明显增多。相比于CFA组,EA GV20明显改善CFA诱发的痛觉过敏在MWT(*P<0.05)和TWL(*P<0.05),然而SEA GV20组没有统计学意义。相似地,EA ST36与CFA相比也明显增加MWT(**P<0.01)和TWL(*P<0.05)。此外,EA GV20和EAST36均能在脊髓背角的浅层(**P<0.01 vs CFA)显著减少CFA诱发的活化神经元c-fos的表达,而在脊髓背角的深层不产生抑制作用。然而,不管是行为学还是fos活化情况,EA GV20与EA ST36相比,都没有统计学差异。 结论: (1)通过抗炎、抗氧化应激以及抗凋亡作用,EA ST36预处理在缺血再灌注24h后能够产生脑缺血耐受作用,并且与EA GV20预处理作用相似。 (2) EA GV20能够在短期阶段(2.5 h)缓解CFA-诱发的炎性痛,并且减少脊髓背角浅层Ⅰ-Ⅱ的c-fos的表达,与EAST36产生相似的镇痛作用。 (3)不管是在脑缺血再灌注还是炎性痛中,EA GV20与EA ST36都能发挥类似的保护作用,初步说明至少GV20和ST36之间不存在穴位特异性。