论文部分内容阅读
目的:探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体(proliferator-adtivated receptor gammar PPARγ)配体罗格列酮(Rosiglitazone RSG)对肺腺癌血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)表达的调节作用,揭示RSG抑制肺腺癌血管生成的机制。旨在为肺腺癌抗肿瘤血管治疗提供理论和实验依据。方法:体外培养人肺腺癌细胞株A549,不同浓度RSG孵育24h后,采用两步非生物素免疫组化(PV)法检测用药前后A549细胞VEGF蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测用药前后A549细胞PPARγ、VEGFmRNA表达。结果:免疫组化结果显示A549细胞存在VEGF蛋白表达。如图所见,VEGF蛋白阳性信号主要见于A549细胞核膜周围和胞质内,与对照组比较,1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG组VEGF蛋白阳性信号减弱,未见表达位置改变。对照组、1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG组积分光密度(Integrated optical density IOD)分别为2602.45±149.27、2381.32±151.16、1794.18±142.25、938.26±121.32、645.43±136.11、861.31±124.17、2574.64±154.21。10μmol.L-1RSG组IOD为645.43±136.11,表达较对照组IOD 2602.45±149.27明显减少(P<0.01.n=6),10μmol.L-1RSG组VEGF蛋白阳性信号减弱最强,≥20μmol.L-1RSG组阳性信号减弱减少,100μmol.L-1RSG组VEGF蛋白阳性信号减弱不明显,其VEGF蛋白阳性信号与对照组比较表达无统计学差异(P>0.05.n=6)。100ng.ml-1TNP-470组IOD为957.21±148.12,10μmol.L-1RSG组(645.43±136.11)较100ng.ml-1TNP-470组(957.21±148.12)VEGF阳性信号减弱明显,GW9662阻断后的10μmol.L-1RSG组的IOD为1302.53±154.34,对VEGF信号抑制作用减弱(P<0.01,n=6)。RT-PCR结果显示A549细胞存在PPARγmRNA表达,且≥2.5μmol.L-1RSG呈浓度依赖方式上调PPARγmRNA的表达(P<0.01或p<0.05.n=6)。对照组、1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG组PPARγmRNA表达的相对灰度值%分别为:78.71±5.67、79.75±6.45、90.29±4.87、90.50±5.07、103.22±7.52、119.65±9.32、148.51±11.27;RT-PCR结果也显示A549细胞存在VFGEmRNA表达。与对照组比较,RSG组VEGFmRNA表达明显下调。对照组、1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG组VEGFmRNA表达的相对灰度值%分别为:99.16±13.23、68.82±9.49、56.53±3.53、48.57±2.95、16.74±0.93、49.56±4.97、75.63±5.45。可见1.25μmol.L-1 RSG组VEGFmRNA表达已明显下调,10μmol.L-1RSG组下调作用最强,≥20μmol.L-1RSG组下调作用减弱,100μmol.L-1RSG组下调作用不明显,与对照组比较无统计学意义(P>0.05 n=6);并且10μmol.L-1RSG组(16.74±0.93)较100ng.ml-1TNP-470组(37.69±5.94)下调VEGF作用更明显(P<0.01.n=6),PPARγ阻断剂GW9662组(41.63±1.43)明显拮抗RSG下调VEGF的作用(P<0.01 n=6)。结论:1.人肺腺癌A549细胞存在PPARγ和VEGF的表达。2.罗格列酮呈浓度依赖方式上调A549细胞PPARγ的表达。3.罗格列酮对A549细胞VEGF表达有明显的下调作用。4.罗格列酮下调A549细胞VEGF表达的机制部分是通过PPARγ途径。