论文部分内容阅读
鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)是鸡慢性呼吸道疾病(Chronic respiratory disease, CRD)及火鸡传染性窦炎的病原。CRD在世界各地的鸡群中广泛分布,给养禽业造成了严重的经济损失。Toll样受体(Toll like receptor, TLRs)是一种模式识别受体,能够特异地识别病原微生物的保守分子,通过偶联信号传导途径,激活天然免疫细胞,引起一系列的炎症反应。TLRs在介导天然免疫和获得性免疫中起着关键的作用。研究表明,动物对侵入的病原微生物的识别是通过天然免疫系统实现的,存在于细胞表面的TLRs发挥着重要作用。模式识别系统可使动物检测到侵入的病原微生物,并且启动抗微生物的机制。随着对哺乳动物的TLRs配体、种类和生物学功能等的深入了解,为免疫受体与病原体相互作用的机理研究提供了新思路。近年来,禽类TLRs在寄生虫病及病毒感染方面的研究取得了一定的进展。目前MG的感染机制尚未阐明,禽类TLRs及信号通路对MG感染的作用未见报道。因此本试验以分子生物学和细胞生物学为基础,通过细胞水平及动物水平研究TLR2和TLR6介导的NF-κB信号通路对MG感染的作用,为阐明MG的分子致病机制及抵抗或治疗鸡的CRD提供科学依据。本研究主要使用Q-PCR方法检测DF-1细胞经不同处理(TLR2基因超表达、TLR6基因超表达、TLR2和TLR6基因共同超表达以及TLR6基因沉默)后感染MG及11d鸡胚感染MG后不同时间(12d、13d、15d、19d) TLR2、TLR6以及NF-κB信号通路中相关基因(MyD88, NF-κB, TNFα, IL2和IL6)的mRNA表达情况。结果表明:1.TLR2超表达和TLR6干扰处理DF-1细胞后对NF-κB基因以及下游炎症因子均无显著影响;TLR6超表达组以及TLR2,TLR6共表达组中TNFa无显著变化, NF-κB信号通路中的相关基因MyD88, NF-κB, IL2及IL6显著上调(p<0.05)。2.MG感染DF-1细胞与正常DF-1细胞相比,TLR6, MyD88, NF-κB, TNFα和IL6基因表达显著上调(P<0.05),IL2和TLR2表达无明显变化。3.各处理组细胞感染MG后发现,TLR6干扰组除TNFa极显著上调(P<0.01)外,其它基因无显著差异;其余各组NF-κB信号通路中的相关基因MyD88, NF-κB, TNFa, IL2和IL6均极显著上调(P<0.01)。4.MG感染11d鸡胚,12d鸡胚肺组织中NF-κB信号通路各基因表达无显著差异;13d鸡胚肺组织中IL2和IL6基因无显著差异;TLR2和NF-κB信号通路各基因表达量均显著上调(p<0.05);15d鸡胚气管和肺组织中NF-κB信号通路各基因表达显著上调(p<0.05);19d鸡胚气管和肺组织中TLR6极显著上调(P<0.01),TLR2及NF-κB信号通路中相关基因表达量显著下调(P<0.05)。本研究结果显示MG感染DF-1细胞后通过TLR6激活NF-κB信号通路促使各基因表达上调,说明TLR6是MG感染细胞的一个关键信号基因;TLR2对TLR6有协同作用,但对MG的固有免疫没有关键作用;TNFa是炎性反应的关键因子,在MG感染中TNFa不仅受NF-κB信号通路中的基因调控,还可能存在其它的调控途径。鸡胚在感染MG前期,NF-κB信号通路中各基因调控与细胞中一致,而19d的鸡胚与前期结果相反,推测免疫过程中存在负反馈调节,具体调控机制有待进一步研究。