醛糖还原酶(AKR1B1)属于醛酮还原酶超家族(AKRs)成员之一,文献表明醛糖还原酶AKR1B1的差异性表达与人类的多种疾病有着密切关系。醛糖还原酶参与糖代谢过程,是糖代谢多元醇通路的关键限速酶,与糖尿病多种并发症密切相关。醛糖还原酶还在很多炎性疾病中发挥着重要作用,如:动脉粥样硬化、脓毒症、哮喘、眼葡萄膜炎等。有研究还表明,醛糖还原酶在人类多种肿瘤中如:肺癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌中过度表达,揭示AKR1B1可能在癌症的发生发展中发挥作用。本文选取醛糖还原酶AKR1B1蛋白作为研究对象,构建AKR1B1-pET-15b-BL21(DE3)重组表达菌株,利用大肠杆菌BL21(DE3)原核表达人醛糖还原酶AKR1B1蛋白,对蛋白的表达条件进行优化。免疫小鼠制备人醛糖还原酶AKR1B1蛋白多克隆抗体。选取人胚肺细胞MRC-5以及人肺癌细胞A549,建立上述两种细胞的体外培养技术。通过提取细胞总蛋白以及总RNA,在蛋白质水平以及核酸水平上鉴定人醛糖还原酶AKR1B1蛋白在正常的人肺细胞中与人肺癌细胞中表达的差异,从而研究人醛糖还原酶AKR1B1蛋白与肺癌的相关性。本文原核表达出了具有生物活性的人醛糖还原酶AKR1B1蛋白,优化条件并大量进行表达。免疫小鼠获得了鼠多克隆抗体,抗体效价达到了32000。在两种细胞中的检测结果为,在蛋白质水平上肺癌细胞中醛糖还原酶AKR1B1蛋白的含量约为人胚肺细胞中的3倍;在核酸水平上肺癌细胞中醛糖还原酶AKR1B1的表达量约为人肺细胞中的4.1倍。实验结果表明AKR1B1在人类肺癌细胞中过量表达,可能与肺癌发生发展具有相关性,为进一步研究AKR1B1在肺癌的发生发展中的作用机制提供理论及实验基础。