本研究利用碳化二亚胺（EDC）法分别合成了链霉素（SM）与载体蛋白BSA（牛血清白蛋白）、HSA（人血清白蛋白）、OVA（卵清白蛋白）和KLH（血蓝蛋白）的连接物,制备了四种人工抗原,并免疫小鼠,获得针对链霉素的抗体。用紫外分光光度法进行了鉴定,并计算连接比率,结果分别是22:1（SM-BSA）、26:1（SM-HSA）、29:1（SM-OVA）和495:1（SM-KLH）。间接ELISA检测结果显示,SM-BSA、SM-HSA、SM-OVA三种连接物在三免后抗体效价均达到1:3200以上,SM-KLH免疫后抗体水平参差不齐,高者可达1:12800,低者只有1:400。 成功建立了检测抗链霉素抗体的间接ELISA方法,其主要条件如下:pH9.6、0.005mol·L-1的碳酸盐缓冲溶液（CBS）为包被液,0.5μg·mL-1的连接抗原SM-HSA（链霉素—人血清白蛋白）为包被抗原,0.5%明胶为封闭液,1:1000稀释的HRP酶标记的羊抗小鼠抗体作为二抗,TMB（3,3,5,5-四甲基联苯胺）作为底物。试验证明本法特异性强,有较好的重复性。用该法对SM免疫小鼠的血清抗体及其杂交瘤细胞单抗上清进行检测,获得满意的效果。 通过细胞融合,获得一株能稳定分泌抗链霉素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1B6。其细胞培养上清效价达1:12800,腹水效价为1:819200,单克隆抗体亚型为IgG1/κ。该单抗与其他抗生素的交叉反应率均低于0.01%。该杂交瘤细胞株连续传代26代,6个月内冻存、复苏3次,仍能稳定分泌抗SM的单抗。 利用1B6杂交瘤细胞株的小鼠腹水单抗建立了检测SM残留的竞争ELISA方法。其关键步骤的最佳试验条件为:最佳包被抗原浓度为0.5μg·mL-1,腹水的最佳稀释比例是1:5×10~4。最适检测范围为10μg·mL-1-10ng·mL-1,检测限量为10ng·mL-1,得到的回归方程是y=-0.2162x+0.2304,R~2=0.9599。该方法有待进一步研究、改进,并结合金标免疫层析做成试纸条,以用于生产实践中链霉素残留的快速检测。