ATP敏感性钾离子通道在硫氢化钠对烧伤血清干预表皮细胞影响中作用的研究

来源 :青海大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zhuzhutoutuo
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目的:探讨外源性硫化氢(H2S)是否通过干预ATP敏感性钾离子通道(KATP通道)的途径在烧伤血清损伤表皮细胞过程中起作用。方法:将在新生1天的乳鼠背部提取的表皮细胞作为研究对象,传代培养至第3代,随机分为6组:胎牛组、正常对照组、烧伤对照组、NaHS组、格列本脲(Gli)组、Gli+NaHS组,接种于96孔板,继续培养24h后进行同步化,胎牛对照组、正常对照组、烧伤对照组分别用胎牛血清、正常大鼠血清及烧伤血清培养基培养,分别干预1、2、4、6、8h,NaHS组及Gli组分别用含有烧伤血清培养基干预后,再分别用浓度为(50、100、150、200、250μmol/L)的NaHS溶液及200μmol/L的Gli溶液干预,Gli+NaHS组用含有10%烧伤大鼠血清培养基干预后,再分别用Gli和NaHS干预,最后均加入CCK-8试剂,于酶标仪中测定在450nm处的OD(吸光度)值;提取各组干预后表皮细胞总蛋白后采用Western blot检测各组KATP通道蛋白的表达水平。结果:1.在同一时间点,胎牛组和正常组OD值比较,差异无统计学意义(P>0.05),正常组与烧伤组之间的差异在4h后有统计学意义(P<0.05);2.在同一浓度梯度内,烧伤组与NaHS组OD值进行比较,当NaHS的干预浓度C<150μmol/L时,P>0.05,差异无统计学意义,当NaHS的干预浓度C≥150μmol/L时,P<0.05,差异有统计学意义;3.在同一时间点,烧伤组与Gli组OD值进行比较,烧伤组高于Gli组,P<0.05,差异有统计学意义,NaHS组与Gli+NaHS组进行比较,NaHS组高于Gli+NaHS组,P<0.05,差异有统计学意义;4.烧伤组KATP通道蛋白的表达水平低于正常组及胎牛组,P<0.05,差异有统计学意义,外源性H2S干预后KATP通道蛋白的表达水平较烧伤组升高,加入Gli后KATP通道蛋白的表达水平较NaHS组降低,P<0.05,差异有统计学意义。结论:1.烧伤血清干预时间大于4h后,其对细胞发挥明显的损伤作用;2.外源性硫化氢NaHS干预浓度达到150μmol/L后,可以发挥明显的细胞保护作用;3.KATP通道阻滞剂Gli可以明显抑制NaHS的细胞保护作用,降低细胞的存活率。4.外源性H2S通过调控KATP通道蛋白水平拮抗烧伤血清干预表皮细胞的损伤,对烧伤后表皮细胞起到保护作用。
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