目的:肝癌是严重威胁人类健康的疾病,肝癌患者占全世界癌症患者的5%以上,其发病率在未来的十几年仍会持续上升。目前治疗肝癌的主要方法为手术切除、肝移植和肝动脉化疗栓塞。由于肝癌患者在疾病早期症状不明显,诊断困难,确诊时大多数患者已是肝癌晚期或者已经转移,错过手术最佳时机,因此对多数患者来说手术切除和肝移植这两种方法并不适用。在B细胞的生长分化和相关的恶性肿瘤发病过程中,不同类型的受体和非受体酪氨酸激酶扮演着至关重要的角色。与B细胞受体通路相关的抑制剂,具有广泛的应用前景,如脾酪氨酸激酶（Spleen tyrosine kinase,Syk）抑制剂、磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）抑制剂、布鲁顿酪氨酸激酶（Bruton^’s tyrosine kinase,BTK）抑制剂等。BTK是属于TEC家族的一种非受体蛋白激酶,主要在B细胞中表达。靶向酪氨酸激酶抑制剂是治疗恶性肿瘤的高度特异性药物。依鲁替尼是不可逆性的布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂,以共价键的形式与BTK的半胱氨酸481位点结合,抑制BTK的活性。其口服吸收非常快速,血浆药物浓度在口服后1-2小时达到最高,半衰期为2-3小时。依鲁替尼主要是应用于B细胞相关的恶性肿瘤中。2013年依鲁替尼作为突破性新药被美国FDA批准为治疗套细胞淋巴瘤（MCL）的药物。随着研究的深入,扩大了药物的适应症,已成为治疗慢性淋巴细胞性白血病（CLL）和原发性巨球蛋白血症（WM）的药物。到目前为止,依鲁替尼仍然是临床上唯一一个应用于治疗多种B细胞肿瘤的BTK抑制剂。依鲁替尼不仅对B细胞相关的恶性肿瘤有抑制作用,对一些实体瘤也有抑制作用,包括前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌和胰腺癌等。到目前为止尚未报道依鲁替尼对肝癌的作用,基于此,本课题拟研究依鲁替尼及其衍生物对肝癌细胞抑制作用,并探讨其可能的作用机制。研究方法:传代培养肝癌细胞HepG2,Bel-7402和正常肝细胞L02。MTT法检测不同浓度的依鲁替尼及衍生物对肝癌细胞株和正常肝细胞株的增殖抑制作用。流式细胞术PI单染法检测不同浓度的依鲁替尼及其衍生物对肝癌细胞周期分布的改变。流式细胞术Annexin V/PI双染法检测不同浓度的依鲁替尼及其衍生物对肝癌细胞的凋亡诱导作用。Western blot方法检测在肝癌细胞中不同浓度的依鲁替尼及其衍生物对相关蛋白表达的影响。结果:1.MTT实验结果表明,在肝癌细胞株HepG2和Bel-7402中,不同浓度的依鲁替尼和衍生物对肝癌细胞有明显的增殖抑制作用,呈现出时间和浓度依赖性。虽然两种药物对肝癌细胞有几乎相同的IC₅₀值,衍生物对肿瘤细胞的选择性高于依鲁替尼;2.PI实验结果表明,依鲁替尼和衍生物均可以引起肝癌细胞S期阻滞;3.流式细胞术检测肝癌的细胞凋亡结果显示,不同浓度的依鲁替尼和衍生物可以诱导细胞凋亡,呈现出浓度依赖性;4.Western blot实验结果表明,依鲁替尼和衍生物呈现出剂量依赖性地降低肝癌细胞中p-BTK的表达水平;5.Western blot实验结果表明,依鲁替尼和衍生物呈剂量依赖性地降低肝癌细胞中Bcl-2和Pro-caspase 3蛋白的表达。结论:1.依鲁替尼和衍生物呈浓度和时间依赖性地抑制肝癌细胞的增殖,并且依鲁替尼衍生物具有更高的选择性。2.依鲁替尼和衍生物通过细胞周期阻滞作用和诱导细胞凋亡作用抑制肝癌细胞的增殖。