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目的:探讨由Kv1.3通道基因介导的Treg细胞活化与心肌成纤维(CFs)细胞间的相互作用关系,明确Kv1.3通道基因在Treg细胞活化并促进心肌纤维化过程中的关键地位。方法通过基因工程方法构建靶向RNA干扰(RNAi)KCNA3(Kv1.3)基因的慢病毒载体,体外转染Treg细胞后与CFs共培养,RT-qPCR法和全细胞膜片钳法检测转染Treg细胞基因沉默效率;ELISA法检测共培养细胞分泌因子的变化;CCK-8法检测共培养体系细胞的增殖变化;In cell western法检测共培养体系Treg细胞上的Kv1.3通道蛋白的表达。结果:1.成功构建基因干扰的慢病毒载体并转染Treg细胞:与正常组相比,沉默组Treg细胞Kv1.3 mRNA表达明显降低(P<0.01),抑制率为78.0%;与正常组相比,沉默组Treg细胞Kv1.3钾通道+40mV的峰值电流密度明显降低(P<0.01),其抑制率为71.3%;2.CCK-8实验表明:CFs+Tregs组较CFs组增殖最明显(P<0.01);CFs+Tregs+EPL组较CFs+Tregs组增殖明显降低(P<0.01);CFS+RNAi-Tregs组较CFs+Tregs组增殖明显降低(P<0.01);CFs+RNAi-Tregs+EPL组较CFs+RNAi-Tregs组增殖无明显变化。3.ELISA法检测显示:CFs+Tregs组分泌的Ⅰ型胶原酶、Ⅲ型胶原酶、基质金属蛋白酶(MMP-2)较CFs组的明显增多(P<0.01);CFs+Tregs+EPL组较CFs组分泌的三类细胞因子水平明显减少(P<0.01);与CFs组相比,CFs+Tregs组Treg细胞内、外液的IL-10水平无明显变化,TGF-β水平明显增多(P<0.01);CFs+Tregs+EPL组IL-10水平降低(P<0.05),TGF-β水平明显降低(P<0.01);EPL能明显抑制Treg细胞内、外液的TGF-β水平(P<0.05)。与Tregs组相比,RNAi-Tregs组内、外液的IL-10水平无明显变化,TGF-β水平明显降低(P<0.01)。CFs+RNAi-Tregs组较CFs+Tregs组内、外液的TGF-β水平明显降低(P<0.01)。4.Tregs+CFs组Kv1.3和KCa3.1基因mRNA相对表达量较Tregs组明显增多(P<0.01);Tregs+CFs+EPL组Kv1.3和KCa3.1基因mRNA相对表达量较Tregs+CFs组降低(P<0.05)。RNAi-Tregs组Kv1.3基因mRNA相对表达量较Tregs组明显降低(P<0.01);RNAi-Tregs+CFs组KCa3.1基因mRNA相对表达量较Tregs+CFs组无明显变化;Tregs细胞上CRAC基因mRNA相对表达量无明显变化。5.与Tregs组相比,Tregs+CFs组Kv1.3蛋白表达明显增多(P<0.01),而Tregs+CFs+EPL组Kv1.3蛋白明显降低(P<0.01)。RNAi-Tregs Kv1.3蛋白亦明显降低(P<0.01)。与Tregs+CFs组相比,RNAi-Tregs+CFs组Kv1.3蛋白亦明显降低(P<0.01)。而RNAi-Tregs+CFs组与RNAi-Tregs+CFs+EPL组Kv1.3蛋白表达无明显变化。结论Tregs与CFs体外共培养,Kv1.3通道介导Tregs活化,并能明显诱导CFs的增殖;而依普利酮可通过直接抑制Kv1.3通道,抑制Tregs活化,减少TGF-β的分泌,从而减少CFs的增殖,即抑制心肌纤维化。提示:Kv1.3可作为心衰治疗的潜在免疫学靶点。