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目的 本文在去卵巢(OVX)大鼠模型上,观察下丘脑孤啡肽(Nociceptin/OrphaninFQ,OFQ)及孤儿受体(opiod receptor-like receptor 1,ORLl)是否参与电针对黄体生成素(luteinizing hormone,LH)超常释放的影响,进一步探讨电针作用的神经内分泌机制。同时为了研究下丘脑孤啡肽对垂体LH分泌的药理作用以及它参与性周期调节的可能的生理作用,拓展对下丘脑孤啡肽及其受体生物学功能的认识,本文还观察了侧脑室给予孤啡肽对去卵巢大鼠垂体分泌LH的影响以及下丘脑孤啡肽及其受体表达在大鼠性周期中的变化。方法 (1)雌性SD大鼠随机分为假手术组、假手术电针组、去卵巢组和去卵巢电针组。采用放射免疫法(RIA)测定各组动物血清LH和雌二醇(estradiol,E2)水平。(2)用免疫组化、Westernblot和RT-PCR观察各组下丘脑内侧隔核(MS)、斜角带核(DBB)、内侧视前区(POA)、腹内侧核(VMH)、正中隆起(ME)和弓状核(ARC)等核团OFQ免疫阳性神经元数目和神经纤维光密度的变化及其基底下丘脑(medial basalhypothalamus,MBH)OFQ及ORL1受体mRNA和蛋白表达。(3)应用侧脑室注射的方法和放射免疫法(RIA)观察OVX大鼠给予不同剂量OFQ(2、20、200nmol)及其受体拮抗剂[Nphe1]Nociceptin(1-13)NH2,NC13(剂量为20、50、100、200nmol)对血清LH水平的影响。(4)用去卵巢大鼠作为孤啡肽对垂体LH释放的影响的动物模型,观察孤啡肽和ORL1受体拮抗剂NC13或NMDA受体拮抗剂MK801对垂体LH释放的影响。OVX大鼠分为对照组(Control)、给药组(OFQ)、拮抗剂预处理组(NC13+OFQ或者MK801+OFQ)和拮抗剂(NC13或者MK801)组,并同时观察上述各组下丘脑目的核团GnRH免疫阳性神经元数目和神经纤维光密度的变化。(5)应用离体垂体切片孵育观察OFQ对离体垂体LH释放的影响。(6)用RT-PCR和Western blot技术研究ORL1受体在大鼠垂体中的表达情况。(7)采用免疫组化和RT-PCR观察正常大鼠性周期不同时相下丘脑相关核团OFQ及其ORL1受体的蛋白和mRNA表达的变化。(8)观察侧脑室给予OFQ对雌孕激素化大鼠(EBP-OVX大鼠)血清LH峰的影响。结果 (1)大鼠去卵巢后,垂体LH出现超常分泌,电针处理后,去卵巢大鼠LH超常分泌受到明显抑制。电针可使去卵巢大鼠下降的血雌二醇水平有一定程度的回升。(2)去卵巢大鼠下丘脑内侧视前区(POA)、腹内侧核(VMH)和弓状核(ARC)OFQ免疫阳性神经元数目和正中隆起(ME)OFQ免疫阳性纤维平均光密度明显下降。电针后,上述指标呈不同程度的明显回升;去卵巢大鼠基底