目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的甲基化结构修饰,测定EGCG衍生物对人肝癌多药耐药细胞的逆转活性,从EGCG衍生物中初步筛选出低毒、高效、稳定的MDR逆转剂。方法:（1）以碘甲烷为甲基供体,N₂为保护气,采用化学合成的方法研究EGCG的甲基化结构修饰,并通过NMR对反应产物进行结构鉴定。（2）甲基四唑蓝（MTT）法检测敏感细胞株BEL-7402和耐药细胞株BEL-7402/5-FU对多种化疗药物的IC₅₀,确定相应耐药倍数。（3）甲基四唑蓝（MTT）法检测EGCG衍生物对肝癌细胞及其耐药株的毒性作用,根据LOGIT软件求得10%的细胞生长受到抑制所需药物浓度(IC₁₀)。选取低于IC₁₀的EGCG浓度进行逆转耐药性浓度依赖实验。（4）荧光双标记荧光显微镜观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡并计算凋亡率。结果:（1）完成EGCG的甲基化结构修饰,并从反应产物中分离纯化出4个EGCG甲基化衍生物,确证了其化学结构。（2）5-FU诱导培养的BEL7402/5-FU细胞对5-FU具有明显的耐药性,耐药指数为49.4,对ADM、VCR有交叉抗药性,对柔红霉素、阿糖胞苷抗药性不明显。（3）EGCG和EGC对肝癌细胞生长有一定抑制作用。随着浓度增加,肿瘤细胞存活率逐步降低。对BEL7402 IC₅₀分别为964.1μmol·L^-1和731.0μmol·L^-1。对BEL7402/5FU IC₅₀分别为2343.7和1585.3μmol·L^-1;IC₁₀分别为74.4μmol·L^-1和87.2μmol·L^-1。1a、2a、3a和4a对肝癌细胞生长有一定抑制作用。随着浓度增加,肿瘤细胞存活率逐步降低。对BEL7402 IC₅₀分别为2121.9、89.4、152.1、164.0μmol·L^-1 ;对BEL7402/5FU IC₅₀分别为648.6、119.5、272.4、185.6μmol·L^-1,IC₁₀分别为76.8、19.5、56.8、8.8μmol·L^-1。1b、2b和3b对肝癌细胞生长有一定抑制作用。随着浓度增加,肿瘤细胞存活率逐步降低。对BEL7402 IC₅₀分别为144.2、87.1、476.0μmol·L^-1;对BEL7402/5FU IC₅₀分别为235.8、116.4、420.7μmol·L^-1,IC₁₀分别为28.1、19.0、46.5μmol·L^-1。4b对肿瘤细胞生长无抑制作用。1c、2c、3c和4c对肝癌细胞生长有一定抑制作用。随着浓度增加,肿瘤细胞存活率逐步降低。对BEL7402 IC₅₀分别为4.17、127.4、101.8、177.2μmol·L^-1 ;对BEL7402/5FU IC₅₀分别为6.20、131.2、147.6、256.4μmol·L^-1。对BEL7402/5FU IC₁₀分别为0.30、6.8、17.3、43.4μmol·L^-1。选取IC₁₀以下浓度药物,EGCG(65.5μmol·L^-1)、EGC(81.7μmol·L^-1)、1a(105.3μmol·L^-1)、2a(23.7μmol·L^-1)、3a(48.6μmol·L^-1)、4a(8μmol·L^-1)、1b(11.0μmol·L^-1)、2b(7.4μmol·L^-1)、3b(46.1μmol·L^-1)、2c(6.8μmol·L^-1)、3c(14.8μmol·L^-1)、4c(50μmol·L^-1)联合5-FU作用,使肝癌耐药细胞株IC₅₀下降。对BEL-7402/5-FU细胞株逆转倍数分别为5.4、2.7、2.9、2.9、4.1、2.3、5.4、3.4、7.6、4.8、2.4、4.6倍。与单独应用5-FU相比,3a(48.6μmol·L^-1)、1b(11.0μmol·L^-1)、3b(46.1μmol·L^-1)、2c(6.8μmol·L^-1)、4c(50μmol·L^-1)联合5-FU作用IC₅₀下降明显;EGC(81.7μmol·L^-1)、1a(105.3μmol·L^-1)、2a(23.7μmol·L^-1)、4a(8μmol·L^-1)、2b(7.4μmol·L^-1)、3c(14.8μmol·L^-1)联合5-FU作用IC₅₀下降不明显。其中3b(46.1μmol·L^-1)的逆转效率比阳性对照剂EGCG强,1b(11.0μmol·L^-1)的逆转效率与阳性对照剂EGCG相似。（4）药物作用后荧光显微镜下可见肝癌细胞AnnexinV-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。凋亡检测结果显示,联合用药组细胞凋亡率均高于单独用5-FU组。与EGCG对照组凋亡率（30.17±2.92）%相比,2a(22.7μmol·L^-1)、4a(8.0μmol·L^-1)、1b(28.1μmol·L^-1)、2b(7.4μmol·L^-1)、3b ( 44.3μmol·L^-1 )、2c(6.8μmol·L^-1)、4c ( 40.0μmol·L^-1 )联合5-FU(7692.3μmol·L^-1)凋亡率显著提高;3a(48.6μmol·L^-1)、3c(14.8μmol·L^-1)组凋亡率与EGCG相似,无显著性差异。另外,单独用低剂量1c(6.4μmol·L^-1)细胞凋亡率也高于单独用5-FU组。结论:采用化学合成方法能有效完成EGCG的不定向甲基化结构修饰,并分离鉴定出4个EGCG甲基化衍生物,分别为1a、2a、3a和4a。其中1a为全甲基化产物。本课题组合成的EGCG烷基化衍生物3a、1b、3b、1 c、2c、4c抗癌、逆转肝癌多药耐药性有显著提高,是具有良好前景的衍生物,很有希望开发成有自主知识产权的一类抗癌新药。