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实验目的:
趋化因子受体可以通过调节肿瘤细胞在细胞外基质的黏附来影响肿瘤的侵袭和转移,而基质金属蛋白酶几乎能降解细胞外基质中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障,在肿瘤侵袭转移中起关键性作用。我们希望通过CC族趋化因子受体7(CCR7)的配体CC族趋化因子配体19(,CCL19)对头颈鳞癌转移CCR7高表达细胞系PCI-37B的诱导,以及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9)特异性抑制剂SB-3CT的阻断作用来证明CCR7通路可以激活MMP-9的表达,同时探讨SB-3CT对头颈鳞癌的的抑制逆转作用,以期望为头颈部鳞癌基础研究和有效临床治疗探求出一条新的途径。
实验方法:
培养人头颈鳞癌转移细胞系PCI-37B,将CCL19依次作用于人头颈鳞癌细胞系PCI-37B,应用明胶酶谱法检测CCL19对MMP-2,MMP-9蛋白的活性是否有影响;应用WesternBlot法检测CCL19是否促使PCI-37B细胞内MMP-9蛋白表达上调以及对此作用的影响;用趋化侵袭试验法,观察相比较无CCL19诱导组,CCL19对加与不加MMP-9的抑制剂SB-3CT组对PCI-37B细胞侵袭、迁移的影响;应用免疫组织化学技术检查头颈部鳞状细胞癌原发灶、淋巴结转移灶、正常口腔黏膜组织以及正常淋巴结中CCR7和MMP-9蛋白的表达情况以及他们的相互关系。
结果:
1.CCL19对MMP-2的表达和活性无明显影响(P>0.05),但在CCL19的诱导MMP-9高表达并且显著提高它的活性(P<0.05)。2.CCL19诱导PCI-37B细胞的侵袭和趋化能力,而SB-3CT则显著抑制其侵袭的能力(P<0.05)。3.免疫组化可以发现CCR7和MMP-9在头颈部鳞状细胞癌原发灶、淋巴结转移灶中高表达,而在正常口腔黏膜组织、正常淋巴结组织中表达相对较低,两者的表达具有一定的正相关性。CCR7和MMP-9表达的强弱与患者年龄、性别无明显差异(P>0.05),而与头颈部鳞状细胞癌的分期、分级有明显差异(P<0.05)。
结论:
1.头颈部鳞癌中,CCL19的刺激可以激活MMP-9的信号传导通路,MMP-9的抑制剂SB-3CT可以抑制CCL19的诱导作用,而对于MMP-2这种作用则基本不存在。2.CCR7可以通过MMP-9路径调节头颈部鳞癌的侵袭、趋化作用。3.CCR7与MMP-9在头颈部鳞状细胞癌的表达具有正相关性,可以作为头颈部鳞癌的一个诊断评价指标。