槐耳清膏体外诱导人肝癌细胞凋亡实验研究

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目的观察槐耳清膏在体外对人肝癌细胞株HepG-2凋亡的影响,了解槐耳清膏治疗肝细胞癌的机理。方法以MTT法检测槐耳清膏的细胞毒作用,比较槐耳清膏处理前后HepG2和HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性;应用流式细胞仪检测不同剂量槐耳清膏作用HepG2细胞的凋亡峰及凋亡率;TUNEL法检测不同浓度槐耳清膏作用HepG2细胞的凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳分析不同浓度的槐耳清膏处理HepG2细胞后DNA断裂带。结果槐耳清膏在0.008g/L时对HepG2和HepG2/ADM细胞无明显毒性,超过此浓度则呈剂量效应关系,槐耳清膏对HepG2,HepG2/ADM的IC50分别为0.917g/L和1.66g/L,使用0.008g/L浓度槐耳清膏后HepG2细胞和HepG2/ADM细胞对ADM、DDP、MMC和5-FU的IC50明显降低,HepG2/ADM细胞在槐耳清膏作用前后对上述四种化疗药物的IC50分别为:0.913±0.063、0.895±0.096、0.26±0.015、1.169±0.039 mg/L和0.247±0.026、0.352±0.016、0.109±0.013、0.412±0.021 mg/L。流式细胞仪检测结果显示:槐耳清膏诱导肝癌细胞凋亡在浓度为0.1g/L组、1g/L组、5g/L组、10g/L组的细胞凋亡率(%)分别是3.6±0.53、7.25±0.96、8.96±1.56、13.65±1.38,而阴性对照组为2.7±0.36,5-FU组为15.98±1.34,表明随着槐耳清膏浓度的增加其诱导肝癌细胞的凋亡率逐步增加;相同浓度(5g/L组)的槐耳清膏在作用24h、48h、72h的凋亡率分别为8.96±1.56、26.34±1.1、30.89±1.2,表明其诱导肝癌细胞凋亡的作用随药物作用的时间的延长而上升。TUNEL法检测细胞凋亡的检测结果为:槐耳清膏诱导肝癌细胞凋亡在浓度为0.1g/L组、1g/L组、5g/L组、10g/L组的细胞凋亡率(%)分别是2.35±0.32、5.96±0.68、7.85±0.96、12.96±1.36,阴性对照组的细胞凋亡率为1.23±0.21,5-Fu组的细胞凋亡率为13.56±1.45,表明随着槐耳清膏浓度的增加,其凋亡率亦明显升高。DNA琼脂糖凝胶电泳分析显示,经不同浓度槐耳清膏处理的HepG2细胞DNA断裂成相差约200bp的片断,呈现凋亡细胞特征的“梯形条带”(laddle)。结论槐耳清膏在体外能有效地抑制肝癌细胞生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。为槐耳清膏在临床上对肝癌的化疗提供了一定的理论依据。
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