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目的：对哈尔滨医科大学附属第一、二医院呼吸科呼吸道感染疾病就诊患者的痰标本进行呼吸道合胞病毒的检测，并对呼吸道合胞病毒进行分离及鉴定。 方法：采用真接免疫荧光法(DIF)，对2007、2008年入院的呼吸道疾病就诊患者痰标本中的呼吸道合胞病毒进行检测。对呼吸道合胞病毒阳性标本经过初步处理后接种于HeLa细胞进行病毒扩增，用空斑实验分离纯化，提取总RNA。应用生物信息学软件对呼吸道合胞病毒保守序列进行分析，运用引物设计软件在其N基因序列设计相应引物，RT-PCR对目的片段进行扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。 结果：直接免疫荧光检测到呼吸道合胞病毒阳性标本。经过直接免疫荧光检测，2007年共检测合格标本399例，检出呼吸道合胞病毒阳性29例：春、夏、秋、冬四季RSV的感染率分别为31.0％、13.8％、20.7％、34.5％；<46岁、46～60岁、61～75岁、76～90岁各年龄组RSV的感染率分别为13.8％、10.3％、31.1％、44.8％：肺炎、COPD、支气管肺炎、支气管扩张、哮喘、其他疾病各疾病组RSV的感染率分别为24.2％、13.8％、17.2％、3.4％、0％、41.4％。2009年共检测合格标本440例，检出呼吸道合胞病毒阳性41例：春、夏、秋、冬四季RSV的感染率分别为36.6％、14.6％、24.4％、24.4％；<46岁、46～60岁、61～75岁、76～90岁各年龄组RSV的感染率分别为7.3％、24.4％、51.2％、17.1％；肺炎、COPD、支气管肺炎、支气管扩张、哮喘、其他疾病各疾病组RSV的感染率分别为21.9％、31.7％、17.1％、17.1％、7.3％、4.9％。标本处理后进行空斑实验，出现空斑。RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳结果显示所得的片段为340bp左右，于预期目的片段大小相符。 结论：哈尔滨医科大学附属第一、二医院呼吸科呼吸道感染疾病患者中存在呼吸道合胞病毒感染，分离纯化到A型呼吸道合胞病毒。