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粒系集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factors，G-CSF)，具有特异地刺激和调节粒细胞系统的增殖、分化、存活和活化等作用，因此在放射性损伤的救治以及肿瘤患者放化疗等方面具有良好的应用前景。但G-CSF也与体内炎症等严重病理过程中嗜中性白细胞的大量增加和激活有关。后者又可因“呼吸暴发”效应释放大量氧自由基等成份，在清除异己的同时，对自身组织也产生影响。保持体内粒细胞的动态平衡是对一些临床疾病诊治的重要环节，其中研制和应用抗G-CSF抗体也将是一个重要方面。本研究利用90年代以来发展起来的在基因工程抗体领域具有重大突破的全套噬菌体抗体表面表达技术，对抗G-CSF单链抗体(ScFv)进行了研究。从人重组G-CSF免疫的小鼠脾细胞中提取总RNA，反转录成cDNA后，用抗体可变区PCR混合引物进行全套抗体V_H、V_L扩增，经重叠延伸反应在体外随机装配成ScFv。将其克隆至噬菌粒载体pCANTAB 5E中。电转化含Sup E的E．coli菌株，以辅助噬菌体M13KO7超感染噬菌粒文库，构建成全套ScFv基因表面表达文库。利用固相化G-CSF吸附含有特异抗体片段的噬菌体颗粒进行富集筛选。经四轮panning后，用ELISA法从噬菌体克隆中，筛选到9个具有G-CSF结合活性的完整重组噬菌粒克隆。对其中三个阳性克隆中的ScFv基因全序列进行了核苷酸序列测定，从而获得了6个抗体可变区基因全序列。计算机分析表明它们均系新发现的鼠免疫球蛋白可变区基因。将阳性克隆感染不含Sup E的E．coli菌株，从而获得目的抗体片段的可溶性表达。用特异性ELISA、Dot blots以及G-CSF依赖细胞株抑制实验等进行活性检测，显示其均能与G-CSF特异性结合，表明所得ScFv均为G-CSF特异性抗体分子片段。 我们采用全套抗体噬菌体表面表达系统，绕过杂交瘤技术，从G-CSF免疫小鼠脾细胞mRNA出发，构建全套ScFv基因的噬菌体表面表达文库，从中获得了具有G-CSF结合活性的ScFv片段及其可变区基因，为进一步筛选具有较高亲和