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动物体脂过度沉积导致肥胖,降低胴体的瘦肉率,进而影响肉品质。我国是世界上产量最大的水产养殖大国,养殖鱼类脂肪的过度蓄积已是当前困扰养殖业的主要问题之一。脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)是脂肪分解的关键酶,已被证实是脂肪细胞分化早期的经典标志基因。研究发现,LPL是哺乳类肥胖基因借以调节机体脂质代谢的重要功能蛋白。LPL通过调控其在脂肪组织与其它组织器官表达水平的变化,而对机体脂质蓄积状况产生决定性影响。研究脂肪细胞增殖、分化过程以及与脂肪沉积有关的因素是一项具有现实经济意义的课题。在对脂肪组织在体发育规律进行研究的同时,对脂肪细胞进行体外培养,监测其增殖分化的全过程,是深入探讨脂肪组织的发生及增生的规律和机理,研究动物体内脂肪沉积规律的必要而有效的手段和途径。本实验以草鱼为研究对象,从LPL基因的克隆入手,初步探讨了LPL基因在草鱼九种组织中的表达规律及草鱼成熟脂肪细胞和SVF细胞中表达差异,LPL1及LPL2在草鱼各组织中均有表达,二者在同一组织中的表达量也有所不同。LPL1和LPL2在草鱼成熟脂肪细胞和草鱼SVF细胞中也有表达,在成熟脂肪细胞中的表达量高于SVF细胞,这与LPL基因是脂肪细胞分化的早期标志,分化前期表达量低于分化后互相印证。本实验初步探索了草鱼脂肪细胞的提取、保存与培养的方法与技术,分析草鱼成熟脂肪细胞和SVF细胞的差异,利用扫描电镜和透射电镜观察直观地展现出草鱼成熟脂肪细胞和SVF细胞的三维立体结构和内部各细胞器的超微结构。得出如下结果:1.成功克隆草鱼LPL基因部分cDNA序列,得到两个大小不同的LPL基因片段,大小分别为453bp及360bp,这与日本学者发现的真鲷具有两种类型的LPL基因相类似,说明鱼类有相似的特性。与Genbank已发表的斑马鱼、真鲷、猪、家鼠和大鼠的LPL cDNA进行比对,其中LPL1的同源性依次为66%、62%、65%、68%和67%,LPL2的同源性依次为89%、73%、69%、70%和70%。表明草鱼LPL基因与斑马鱼、真鲷、猪和鼠的在核苷酸水平上有较高的同源性,在不同物种中LPL基因保守性强。2. LPL1及LPL2在草鱼肝脏、鳃、脂肪、肠、脑、肾、性腺、肌肉、心脏这九种组织中均有表达,且LPL1和LPL2在同种组织中的表达量也有所不同。LPL1和LPL2在草鱼成熟脂肪细胞和草鱼SVF细胞中也均有表达,且表达量存在一定的差异,在成熟脂肪细胞中的表达量高于SVF细胞。3.初步建立草鱼脂肪细胞提取与培养体系:提取体系:2%Ⅱ型胶原酶消化液,时间为30min-45min,100目及200目钢筛,离心速度1500-2000rpm,10min。培养体系:温度25℃-28℃,3% CO2,DMEM/F12培养基(含10% FBS)。4.扫描电镜观察草鱼脂肪细胞外部立体结构,透射电镜观察草鱼脂肪细胞内部超微结构,第一次直观地展示草鱼成熟脂肪细胞和草鱼SVF细胞的差异。电镜结果发现,经固定、脱水、样品制片之后,草鱼成熟脂肪细胞是SVF细胞的7-10倍大小。