人bFGF基因转化大豆毛状根表达体系的实验研究

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本研究利用基因重组技术在大豆毛状根中表达人bFGF。将人bFGF基因克隆到质粒pCAMBIA1301载体上,以大豆子叶节和胚轴为外植体,通过发根农杆菌C58C1介导转入到大豆中,经潮霉素抗性筛选,获得潮霉素抗性的毛状根。PCR法扩增检测人bFGF基因的整合。提取毛状根中蛋白,用Western blot印迹分析人bFGF的表达。阳性毛状根中整合并表达人bFGF基因。SDS-PAGE显示样品相对分子量约为18kDa,与人bFGF标准品相对分子量一致,证明人bFGF基因在大豆的毛状根中正确表达。对转化毛状根规模化悬浮培养条件进行了优化,确定了最佳的培养条件,为利用大豆毛状根作为生物反应器工业化生产天然药物奠定实验基础。
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