MicroRNAs(mi RNAs)作为一种新的生物标志物,不仅参与生物体内的基因调控,还与癌症等重大疾病的产生密切相关。因此,探索发展准确的检测miRNA的方法备受关注。本论文研究内容中,我们将催化发夹DNA组装(CHA)和杂交链式反应(HCR)两种恒温无酶扩增技术和化学发光检测相结合,建立了检测miRNA的新方法。主要研究内容如下:一、结合金纳米粒子(AuNPs)的CHA与鲁米诺化学发光体系,建立了一种检测miRNA的新方法。首先,我们设计了巯基(-SH)修饰的P1和生物素(biotin)修饰的P2(bio-P2)两种发夹DNA探针。然后,将探针P1修饰在AuNPs表面。当目标miRNA存在时,其与探针P1的部分序列互补杂交,将P1发夹结构打开,形成P1-miRNA中间体。该中间体可引发bio-P2发夹结构展开,形成P1-P2双链DNA。同时,目标miRNA被顶替下来。随后,miRNA又可与AuNPs表面其余的P1探针作用,进而与P2探针形成P1-P2双链,如此循环,发生CHA反应。实现了bio-P2探针在金纳米粒子表面的富集。再通过链霉亲和素(STV)与biotin的特异性作用,将辣根过氧化物酶(HRP)标记的STV(STV-HRP)结合在AuNPs表面,经过离心分离,利用HRP催化鲁米诺-过氧化氢化学发光反应,实现了miRNA的检测。方法中,miRNA的线性范围为5 pM-100pM,检出限为1.7 pM。该方法操作简便,成本低,可为基于CHA反应的miRNA检测提供一种新策略。二、将HCR和化学发光检测相结合,以AuNPs为载体,发展了灵敏检测miRNA的新方法。实验设计了三种发夹探针:H1,H2,H3。其中,发夹探针H1以-SH修饰,H2以botin修饰。探针H1通过Au-S键结合到AuNPs表面。当反应体系中含有目标miRNA时,其可与发夹探针H1作用,使其结构打开,并释放出HCR的引发序列。随后,该引发序列引发探针H2和H3之间发生一系列的HCR。再基于STV和biotin之间的特异性相互作用,将STV-HRP结合到HCR产物上,应用HRP-鲁米诺-过氧化氢化学发光体系,通过检测化学发光信号强度的变化实现对miRNA的检测。方法可对浓度范围在5 pM-100 pM之间的let-7a进行灵敏检测,检出限为0.13 pM。该方法为miRNA的分析检测提供了一种新思路。