艾灸通过调控RAGE/NF-κB信号通路干预大鼠化疗性肠黏膜炎作用机制的研究

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目的:1.探讨RAGE/NF-κB信号通路在肠黏膜炎中的作用。2.观察艾灸对化疗性肠黏膜炎的保护作用。3.探讨艾灸通过调控RAGE/NF-κB信号通路干预化疗性肠黏膜炎的作用机制。方法:1.通过LPS刺激Caco-2细胞模拟体内肠黏膜炎症状态,运用CCK-8检测LPS、FPS-ZM1对Caco-2细胞增殖影响;Western blot检测ZO-1、Occludin、RAGE、p-NF-κBp65、NF-κBp65、p-IKBa、IKBa蛋白表达;RT-PCR检测RAGE m RNA、NF-κB m RNA、IL-6 m RNA表达水平;ELISA检测Caco-2分泌IL-1β、IL-6表达情况,探讨RAGE/NF-κB信号通路在肠黏膜炎中的作用。2.温和灸大鼠关元穴(CV4)、天枢穴(双侧,ST25)、气海穴(CV6),5-Fu单次腹腔注射建模,记录一般情况、摄食量、体重、隐血实验、大便性状等;ELISA检测血清IL-1β、IL-6表达情况;HE染色、透射电镜观察病理组织学变化;探讨艾灸对化疗性肠黏膜炎的保护作用。3.Western blot检测回肠组织RAGE、p-NF-κBp65、NF-κBp65蛋白表达;免疫组化法、免疫荧光法检测回肠组织RAGE表达;RT-PCR检测RAGE m RNA、NF-κB m RNA表达水平;ELISA检测血清IL-1β、IL-6、RAGE表达情况,探讨艾灸对化疗性肠黏膜炎RAGE/NF-κB信号通路的影响。结果:1.结果显示,与空白组相比,LPS刺激Caco-2细胞24h内对细胞增殖无影响(p>0.05),LPS刺激Caco-2细胞48h,当LPS浓度大于等于1μg/ml可显著抑制细胞增殖(p<0.05);紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达显著下调(p<0.05),IL-1β、IL-6的含量增高(p<0.05);与LPS组相比,抑制RAGE/NF-κB信号通路调低了LPS刺激Caco-2细胞RAGE、p-NF-κBp65、p-IKBa蛋白表达(p<0.05),IL-6 m RNA、RAGE m RNA、NF-κB m RNA表达下降(p<0.05),细胞上清中IL-1β、IL-6含量减少(p<0.05)。2.单次腹腔注射5-Fu造模后,各组大鼠体重、摄食量出现不同程度下降,肠黏膜呈现不同程度损伤;艾灸组体重、摄食量高于同期化疗组,DAI评分低于同期化疗组,血清IL-1β、IL-6含量显著低于化疗组(p<0.05),组织病理显示经艾灸预处理后黏膜损伤减轻。3.单次腹腔注射5-Fu造模后,回肠RAGE表达显著增加,与化疗组相比,艾灸下调了化疗性肠黏膜炎大鼠回肠RAGE、p-NF-κBp65蛋白表达(p<0.05),RAGE m RNA、NF-κB m RNA表达水平下降(p<0.05),血清中RAGE、IL-1β、IL-6含量减少(p<0.05)。结论:抑制RAGE/NF-κB信号通路可减轻肠黏膜炎炎症反应,艾灸预处理可改善5-Fu诱导的大鼠化疗性肠黏膜炎症状,其作用机制可能是通过调控RAGE/NF-κB信号通路实现的。
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