亚致死光催化对水体环境中典型耐药细菌的耐药基因水平转移机理研究

来源 :广东工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:stephenlyx
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伴随着重大公共卫生事件的频繁发生,抗生素的滥用问题日益严重,这让人们越来越意识到这一新兴污染物所带来的健康风险问题。水是地球上最丰富的资源之一,抗生素抗性细菌(ARB)和抗生素抗性基因(ARGs)在水体中的传播所带来健康风险已经成为全球科研学者研究的热点。细菌耐药性的传播方式包括垂直基因转移和水平基因转移,而其中水平基因转移又包括接合转移,转化与转导等。但是总体而言,目前学界对ARGs迁移扩散的研究仅局限于某一种扩散途径,无法从整体上研究ARGs的迁移扩散规律。光催化技术作为一种新兴的高级氧化工艺,是目前可被用于水处理的末端消毒最有潜力的一种技术,如果应用不当也可能对水体中的ARGs迁移扩散产生影响。因此,为了探明水处理末端消毒过程中ARGs的迁移规律,本论文通过选择不同种类的大肠杆菌,并接合UV365nm+纳米Ti O2光催化体系,建立了一套系统评估耐药菌以及耐药基因迁移转化机制的方法。其中选择E.coli DH5α(CTX)、E.coli DH5α(MCR)、E.coli C600用于研究ARGs的接合转移机制,选择E.coli DH5α、E.coli HB101用于探讨ARGs的转化机制。并在此基础上通过研究细菌活性、抗氧化系统、细胞膜变化、ATP含量以及相关基因表达的变化,系统评估了亚致死光催化对ARGs水平转移的影响,以期为科学控制耐药性扩散提供见解与指导。本论文得到的主要研究结果如下:(1)通过UV365nm+纳米Ti O2光催化体系,设置三种细菌(E.coli DH5α(CTX)、E.coli DH5α(MCR)、E.coli C600),并调整光催化强度,使细菌处于亚致死状态,从而研究在亚致死光催化状况下发生ARGs接合转移的可行性,并进一步研究了释放的ARGs进一步发生转化的概率。并通过从细菌活性、抗氧化系统、ATP系统以及相关基因水平的变化研究亚致死光催化下ARGs的接合转移机理。结果表明:当用亚致死光催化仅诱导的供体细菌时(E.coli DH5α(CTX)、E.coli DH5α(MCR)),观察到ARGs的接合转移频率最多增加3-6倍,并且供体菌内部活性氧物种(ROS)水平也同时最多上调了8倍。而当在亚致死光催化状况下仅诱导受体细菌(E.coli C600)时,观察到ARGs的接合转移频率表现出抑制趋势。然而,供体或受体细菌事先被亚致死光催化下诱导一段特定的时间后,接合转移频率最多增加10-22倍。此外,ARGs水平转移频率及其机制与氧化应激系统、ATP系统以及相关基因的表达有关。更重要的是,本论文还进一步研究了ARB细胞外质粒的可转化性和水平转移的贡献。结果表明E.coli C600的转化子数量占接合子的50%,表明转化也可能是ARB在水体中ARGs水平转移的主要途径之一。以上结果表明:亚致死光催化将通过接合转移和转化途径增加ARGs水平转移的频率,并提高ARB在水环境中的传播风险。(2)通过UV365nm+纳米Ti O2光催化体系,设置了两种细菌(E.coli DH5α,E.coli HB101)与携带氨苄青霉素耐药基因AMP的质粒(p UC19),研究了亚致死光催化状况下发生ARGs转化的可行性。并通过从受体菌浓度与孵育温度两个方面优化了亚致死光催化下ARGs的转化模型。并在优化后的模型上,观察ARGs转化在亚致死光催化下的变化。并通过从细菌活性、抗氧化系统、细胞膜系统、ATP系统以及相关基因水平的变化等,研究了亚致死光催化条件下ARGs的转化机理。结果表明:亚致死光催化能够促进ARGs在水环境中的转化。具体而言,E.coli DH5α与E.coli HB101经过亚致死光催化诱导50-60 min后,p UC19所携带的AMP耐药菌的转化频率最多可增加3-5倍。并且ARGs的转化频率还与受体菌的浓度以及转化的孵育温度有关。且实验发现在接受ARGs转化后,受体菌更能适应亚致死光催化带来的不利影响。在机制的研究上,发现细菌体内ROS的升高同样可以促进ARGs的转化。进一步研究发现,亚致死光催化会提升细菌胞外蛋白分泌以及IV型菌毛的表达,这有利于提升细菌的细胞膜转运通道的大小,从而有助于游离ARGs的流入。ROS与细胞膜通透性的提升,会促进Ca2+向细胞内的流入,Ca2+的累积不仅会激活细菌的抗氧化系统,还会诱导细菌凋亡,进而对ARGs的转化产生影响。而相比较ARGs的接合转移,虽然细菌的ATP系统与ARGs的转化不存在直接关联,但是细菌的ATP合成系统抑制可能会导致细菌内部Ca2+的外排功能受阻,进而导致Ca2+在细菌体内的累积,从而对ARGs的转化产生间接影响。综上所述,本论文发现,如果通过光催化将细菌诱导至亚致死状态,将会促进耐药性在水体中的扩散。并且ARGs的扩散途径是多样的,不仅包括接合转移,还包括转化。通过获取以上知识,将为人类综合防治耐药性扩散,消除ARGs这一新兴污染物提供一些见解。
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