水稻2C类蛋白磷酸酶基因OsPP2C30的功能分析

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2C类蛋白磷酸酶(type2C protein phosphatase,PP2C)A亚族成员(PP2CAs)是脱落酸(Abscisic acid,ABA)信号转导途径的重要组成部分,广泛参与ABA介导的逆境胁迫响应。水稻PP2CA基因家族中共含有10个成员,部分基因家族成员的功能已经初步明确。但是其中的OsPP2C30在水稻中的生物学功能还并不清楚。本研究利用表达分析、亚细胞定位和转基因等多种研究手段初步解析了 OsPP2C30在水稻植株生长和ABA信号响应中的作用,主要结果如下:1、利用荧光定量PCR和启动子-GUS染色对OsPP2C30基因的表达模式进行了解析。结果表明,OsPP2C30在各个组织中均有表达,在幼穗中的表达量最高,并且随着穗和颖壳的伸长,其表达量是逐渐下降的,说明OsPP2C30可能在穗和颖壳的发育过程中发挥重要作用;2、在烟草叶片表皮细胞的亚细胞定位表明,OsPP2C30蛋白定位在细胞核上;3、利用酵母双杂交分析了 OsPP2C30与ABA信号通路中的组分OsPYLs和OsSAPKs的互作关系。结果表明,不加入外源ABA的情况下,OsPYL1、OsPYL4、OsPYL5、OsPYL6、OsPYL8、OsPYL9、OsPYL10 和 OsPYL11 能够与OsPP2C30 产生相互作用,但OsPYL2、OsPYL3和OsPYL6与OsPP2C30的互作依赖外源ABA;另外,OsSAPK1、OsSAPK2、OsSAPK8、OsSAPK9 和 OsSAPK10 也能与 OsPP2C30 在酵母中产生相互作用。说明,OsPP2C30是水稻ABA信号通路中的重要组分;4、在粳稻日本晴背景下创建了 OsPP2C30基因的过量表达株系和CRISPR/Cas9突变体。农艺性状调查表明,过量表达OsPP2C30可促进水稻植株生长,正调控水稻株高、粒重和单株产量;而敲除OsPP2C30基因则会导致株高、粒重和单株产量的下降;5、表达分析表明,外源ABA能显著诱导OsPP2C30的表达,并且随着ABA处理时间的增加,OsPP2C30的表达水平提高越明显;通过比较转基因系和野生型在ABA处理条件下的种子萌发率和幼苗生长,过量表达OsPP2C30基因能够降低ABA的敏感性,而敲除OsPP2C30基因能够提高对ABA的敏感性。说明,OsPP2C30是水稻ABA信号通路中的负调控因子。
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