目的分离药用植物刺五加内生放线菌株,初步建立刺五加内生放线菌菌种资源库。揭示刺五加内生放线菌种属资源多样性及在植株不同组织部位分布情况。探究菌株抗菌活性及次级代谢产物合成潜能。方法采集辽宁省本溪市、吉林省梅河口市、吉林省柳河县、黑龙江省穆棱市、河北省兴隆县(雾灵山)5地区野生刺五加植株,流水冲洗并经表面消毒处理,按根、根茎、茎、叶等部位分割并打碎后,用8种分离培养基分离。挑取菌落并转移到ISP2平板上,采用平板划线法纯化菌株并于-80°C冻存。进行菌株基因组DNA的BOX-PCR反应,以排除重复菌株。挑选形态上差异较大菌株及具有特殊形态菌株进行16S r RNA基因序列测定及系统进化分析。了解刺五加内生放线菌种属分布规律及菌株在刺五加各不同组织部位的分布情况。采用平板纸片法检测刺五加内生放线菌的抗菌活性。对菌株进行基于PCR的聚酮合成酶(PKSI,PKSII)、非核糖体肽合成酶(NRPS)、细胞色素p450氧化酶(CYP)和卤化酶(Halogenase)基因检测,考察菌株次级代谢产物合成潜能。结果1共分离到内生放线菌300株,经BOX-PCR排重后共计得到265株,选取的43株代表性菌株分属于放线菌7个亚目,9个科,9个属。链霉菌属和小单孢菌属是其优势菌属。内生放线菌在刺五加植株不同组织部位的分布有很大差异,由根、根茎、茎及叶中分离的放线菌株分别为110株、93株、45株和17株,根及根茎中的放线菌株占分离总数的77%,明显多于其他组织,而叶中的比例最少仅为6%。从不同培养基分离出的放线菌数目有较大差异。LNMS培养基分离菌株效果最佳,共得到60株。海藻糖-无机盐培养基分离的菌株最少,共17株。2将分离所得的265株刺五加内生放线菌进行抗菌活性检测,显现出多种生物活性,对7种检定菌均有不同程度抗性,抗菌谱广,抗菌活性强。至少具有1种抗菌活性的菌株为78株。3从基因检测结果来看,次级代谢产物合成相关基因阳性的菌株为172株,其中PKSⅠ,PKSⅡ,NRPS,Halo和CYP基因的阳性检出菌分别为48株、123株、52株、18株和29株。结论1野生刺五加具有丰富的内生放线菌资源,根及根茎所含内生放线菌数量最多。菌株具有丰富的种属多样性。2刺五加内生放线菌具有较好的抗菌活性,可为新的抗生素筛选提供优质菌源。3刺五加内生放线菌具有丰富的次级代谢产物合成相关基因,具有产生多种类型活性化合物的潜能,可为新活性和新结构的药物先导化合物的发现提供分子依据,具有重要的研究和应用价值。