人源GABA能脊髓前体细胞在大鼠脊髓移植后的分化及对行为学影响

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目的:探究人源GABA能脊髓前体细胞移植大鼠后在体的分化和对行为学的影响。方法:对SD雌性大鼠的胸段脊髓进行干细胞移植后,记录其移植后体重变化确定纳入和排除标准,记录步态BBB评分和ladder评分评估运动功能的变化,并分别在移植后1.5m和3m时间点通过IITC测量双下肢疼痛的阈值,以及通过肌电图来评估H反射和频率依赖的抑制来反应痉挛。进一步应用免疫荧光染色的方法,确定移植细胞的存活的比例,迁移的距离,分化的程度。并在腹腔注射CNO后,激活移植细胞的DREADDs受体,刺激细胞分泌更多GABA递质,进一步验证对正常大鼠中疼痛和痉挛的影响。结果:移植1.5个月后,细胞成功存活,存活数目为15208±9126,迁移距离2.88±0.83mm。然而在移植1.5个月后仍有超过90%的细胞大量表达DCX,只有约12%表达成熟神经元标记Neu N,并且着色比大鼠自身的正常神经元浅,没有出现微管蛋白MAP2的阳性着色,没有表达突触的标志物;行为学上疼痛阈值在1.5个月sham组、vehicle组和graft组相比没有差异,CNO前后也没有明显差异;肌电图H反射,各组之间没有差异,CNO注射前后同样没有差异;通过记录体重发现我们的SD大鼠体重均在基线值的80%以上,符合纳入标准,BBB评分3组之间没有明显差异,ladder错误率中也没有明显的差异;移植3个月后,超过90%的移植细胞开始表达成熟神经元标记Neun,细胞开始生长出不成熟的轴突,少数细胞表达星形胶质细胞的标记物SOX9。3个月的行为学中疼痛在3组间没有差异,CNO前后也没有差异;H反射在3组间没有差异,CNO前后也没有差异。结论:在正常大鼠的胸段脊髓中移植人来源的GABA能的前体细胞,细胞可以存活并按照内源性的发育程序来分化,人的神经前体细胞分化成熟需要3个月,并且这些存活的神经元并没有显著影响正常大鼠自身的生理功能,没有改变疼痛阈值也没有改变肌电图的H反射,可能的原因是正常情况下,大鼠自身的环路结构和突触功能是完整的,并不需要外来的功能整合,外来的移植物也并没有在行为学上发生改变。
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