【摘 要】
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马铃薯(Solanum tuberosum L.)是世界第四大粮食作物。晚疫病是马铃薯生产中面临的最大威胁,病害爆发导致大规模减产。前期研究中克隆到一个类受体激酶基因St LRPK1,初步研究
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马铃薯(Solanum tuberosum L.)是世界第四大粮食作物。晚疫病是马铃薯生产中面临的最大威胁,病害爆发导致大规模减产。前期研究中克隆到一个类受体激酶基因St LRPK1,初步研究表明St LRPK1对马铃薯晚疫病具有广谱抗性。本研究以超量表达St LRPK1的转基因本氏烟草为材料,进一步研究St LRPK1在晚疫病抗性中的作用,探究St LRPK1介导的抗病信号传递途径,解析St LRPK1的抗病机制。主要结果如下:1.利用卡那霉素抗性筛选方法筛选得到超量表达St LRPK1的纯合本氏烟草株系。纯合株系接种晚疫病原菌小种88069进行抗性鉴定,结果表明St LRPK1超量株系晚疫病抗性显著高于对照。2.利用q RT-PCR分析了超量表达St LRPK1本氏烟草株系接种前后PTI marker基因表达。未接种晚疫病菌时,与野生型相比,超量株系中PTI相关marker基因呈上调表达趋势;病原菌诱导24 h表达分析显示,在超量株系中多个PTI抗性相关基因更大幅度上调表达,证明St LRPK1可以通过调控下游PTI抗性相关基因的表达来提高对晚疫病的抗性。3.利用VIGS系统探索了St LRPK1参与的信号途径。结果显示VIGS沉默Nb SIPK后野生型和超量株系出现相同程度抗性下降,说明Nb SIPK不参与St LRPK1介导的抗性,VIGS沉默Nb WIPK后超量株系抗性下降程度显著高于野生型,表明St LRPK1可能通过Nb WIPK传递抗病信号。4.利用烟草叶片瞬时表达体系对St LRPK1进行亚细胞定位,结果显示St LRPK1定位于细胞膜上。5.用St LRPK1激酶域构建酵母双杂交诱饵载体,筛选马铃薯-病原菌互作蛋白c DNA文库,没有筛选到互作蛋白,在St LRPK1与St BAK1的点对点杂交实验中没有检测到互作。6.转录组分析表明,干涉St LRPK1的马铃薯株系与对照E3相比,多个蛋白激酶组成型下调表达,诱导24 h后,更多激酶相对下调表达的同时大量转录因子下调表达。St LRPK1可能通过多个激酶信号途径调控对晚疫病的抗性。
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