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球毛壳菌(Chaetomium globosum)是微生物农药家族中重要的一员,对许多植物病害具有预防治疗的作用。其中,球毛壳菌所分泌的β-1,3-葡聚糖酶可以水解纤维素中的糖苷键,对植物病原菌有强烈的抑制作用。因此,由球毛壳菌中获取β-1,3-葡聚糖酶的基因并使之高度表达,深入研究β-1,3-葡聚糖酶与病原菌的相互作用,对生物农药的推广有着重要意义。本实验所获得的β-1,3-葡聚糖酶的基因全长为1683bp,cDNA长度为1605bp。首先,利用含有EcoR I和Not I酶切位点的引物,扩增出目的基因cgglu。随后,将目的基因cgglu以及表达载体pPIC9K利用EcoR I以及Not I进行双酶切,再利用T4DNA Ligase把目的基因cgglu与表达载体pPIC9K连接,从而构建出重组表达载体pPIC9K-cgglu。将pPIC9K-cgglu经过Kpn2I线性化后,通过电转化的方法转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中。梯度电压实验显示,电压为1000V时转化效率最高,每微克转化子可达80个以上。从转化子平板中随机挑选48个转化子,通过MD及MM平板筛选法进行Mut+以及MutS型转化子的分辨。挑选8个Mut+转化子进行PCR检测,证实重组表达载体成功转化进入毕赤酵母GS115中。随机挑选5个转化子进行诱导表达,并且利用SDS-PAGE进行检测。其中4个转化子成功分泌目的重组蛋白CGGLU,条带大小在50kDa与85kDa之间,比理论值大小54kDa略大。酶学性质分析结果显示,重组蛋白CGGLU最适催化温度为45℃,诱导96h所产生的重组蛋白CGGLU酶活最高,绝对酶活值可达0.186U。抑菌试验显示,重组蛋白CGGLU对三种不同植物病原菌:立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、以及尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)的细胞壁均有酶活反应。其中,对尖孢镰刀菌细胞壁反应酶活最高,可达0.165U。立枯丝核菌及核盘菌细胞壁反应酶活分别为0.123U及0.132U。重组蛋白CGGLU具有一定的抑菌能力,具有很大生物防治的潜能。