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背景:
超声是妇产科领域常用的诊断工具之一,已广泛应用于早早孕的诊断及胚胎、胎儿的发育监测和畸形筛查。灰阶成像技术的进步使超声能清晰的监测卵泡、胚胎及胎儿的发育;体外胚胎移植卵泡针吸穿刺术需要在超声直视下进行;阴道超声能更好的观察胚胎及胎儿的结构,而不受腹部皮肤、脂肪和肌肉组织的干扰;脉冲多普勒技术(PD)、彩色血流成像技术(CDFI)有效提高了早孕诊断的准确率;三维、四维超声能观察到常规二维超声探察不到的切面.这些超声新技术的应用自然伴随着超声输出功率的增加,达到一定水平后对生物组织会产生明显的效应.与传统的B型和M型技术相比,多普勒成像及测量技术输出功率更高,而脉冲多普勒技术则是其中输出功率最高的.目前一个争论的焦点就是无妊娠并发症的妇女在孕早期运用脉冲多普勒检查到底是利大于弊还是弊大于利.欧洲超声医学和生物学联盟(EFSUMB)对孕早期进行阴道超声检查的结论和建议是:由于缺乏长期的、大样本的、重复性的调查研究,孕早期进行阴道超声检查的安全问题值得关注,必须从纯医学的角度认为对胚胎和/或孕母有利才予以阴道超声检查.即使临床认为有必要对胎儿行脉冲或彩色多普勒检查,也要把输出参数设为尽可能低.
超声波引起的生物学效应主要是热效应和空化效应,诊断超声引起的温度升高不超过生理体温1.5℃临床上可忽略热效应的损伤,超过4℃持续5分钟则具有潜在危险性。近年来,随着超声新技术的应用,超声设备的输出声强大幅度增加,超声产科应用的安全性问题受到了研究者极大的关注.胚胎发育是细胞分化组织诱导形态发生和胚体整和等一系列生命现象组成的程序性表达过程,可分为胚前期(受精~14d)、器官形成期(15~56d)、胎儿期(57d~分娩).孕早孕(尤其是器官形成期)胚胎对外界因素非常敏感,这个阶段胚胎的改变不仅可能引起宫内生长异常,胎儿死亡等,最重要的可能是引起出生后迟发性疾病发生的根源,且随着胎儿生长,胎儿骨化越明显,产生热效应的可能增加.这些年来国内外许多学者对此做了相关性研究,但是对超声应用的安全性问题仍有许多尚待解决(1)既往研究都是以动物试验和离体试验为主,也有部分是流行病学调查,而并非直接以人体胚胎作为研究对象;(2)从形态学和生物化学方面研究诊断超声对胚胎组织的影响,是目前主要手段和方法,分子生物学水平的研究很少(3)超声输出剂量、试验条件和试验方法的不一致导致试验结果的多样性,甚至得出相反的结论.本研究拟采用人体早孕绒毛组织作为研究对象,以细胞核内γH2AX含量作为检测DNA损伤的敏感指标,评价一定剂量的超声辐射对人体器官形成期胚胎的DNA损伤作用,并进一步评价损伤的可修复性.
材料与方法:
对拟进行人工流产的90例早孕(42~56天)妇女随机分为5组:I组(20例,对照组)、Ⅱ组(20例,5分钟组)、Ⅲ组(20例,10分钟组)、Ⅳ组(20例,20分钟组),V组(10例,20分钟,辐射48小时后行人工流产术).应用Acuson Aspen彩色多普勒超声仪(Ispta=13mW/cm2,Isppa=52 mW/cm2)对孕囊进行不同时间的定点照射,前四组辐射后1小时内取材,第五组辐射后48小时取材.用免疫组织化学技术检测上述各组绒毛细胞γH2AX蛋白表达情况.
结果:
各实验组的绒毛滋养层细胞γH2AX表达率均升高,各组表达率分别为(16.42±2.87)% (16.63±3.74)%, (23.66±5.28)%, (40.26±9.43)%, (17.31±6.07)%。对照组(Ⅰ组)与辐射5分钟组(Ⅱ组)间无显著差异(P>O.05);对照组与辐射10分钟组(Ⅲ组)、辐射20分钟组(Ⅳ组)间有显著差异(P<0.01);辐射20分钟组与修复组(Ⅴ组)间有显著差异(P<0.01);修复组与对照组间无显著差异(P>0.05).
结论:
1.以γH2AX作为标记物,诊断超声可引起人早孕绒毛DNA损伤
2.诊断超声辐射5分钟不会引起人早孕绒毛DNA损伤
3.诊断超声引起的DNA损伤具有时间依赖性
4.诊断超声引起的DNA损伤至少可以部分被修复
5.诊断超声引起的DNA损伤48小时后可基本修复到正常水平