【摘 要】
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研究从西双版纳采集的10份土壤样品用自行设计的选择培养基,37℃恒温培养72小时,分离到18株产纤维素酶的细菌菌株。经过复筛,得到纤维素酶活性较高产酶菌株YN5和YN9。经过形态特
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研究从西双版纳采集的10份土壤样品用自行设计的选择培养基,37℃恒温培养72小时,分离到18株产纤维素酶的细菌菌株。经过复筛,得到纤维素酶活性较高产酶菌株YN5和YN9。经过形态特征、生理生化特征和16SrDNA序列分析,将菌株YN5初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilissp.)的菌株,菌株YN9初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformissp.)的菌株。
在原始发酵培养条件下,枯草芽孢杆菌YN5的酶活力达到1.0U/ml。对影响其产酶水平的温度、摇床转速和发酵时间以及培养基中的碳源、氮源、无机盐和起始pH等发酵培养条件进行了单因子试验研究,并对碳、氮、磷三因素进行正交试验,对原始培养基进行了优化,结果在CMC-Na1.5%,酵母粉1.0%,K2HPO40.15%,NaCl0.5%,MgSO40.05%,蛋白胨1.5%,初始pH为7.0的优化培养基中,于37℃,200转/分的转速下,培养48小时,产生的纤维素酶活力达到1.5U/ml。
通过硫酸铵盐析,SephadexG-100凝胶过滤,SephacrylS-200凝胶色谱层析,对粗酶进行纯化,获得一个具有纤维素酶活性的蛋白组分,用聚丙烯酰胺变性凝胶电泳确定其分子量约为23KD。
最后对枯草芽孢杆菌YN5纤维素酶的酶学性质进行了研究。确定了该纤维素酶在以CMC-Na为底物时,最适作用温度为60℃,最适pH为5.0,其Km值为0.065g/mL,Vmax为0.013mg/mL·min-1。该纤维素酶在pH4.0~7.0和40~60℃的条件下较为稳定。金属离子Cu2+、Mn2+和Co2+对酶有激活作用,Fe2+、Mg2+和Zn2+对酶有抑制作用。
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