葡萄是地球上最古老的被子植物之一,由于葡萄果实及其加工产品具有丰富的营养价值、药用价值和经济价值,因此在全球被广泛栽培。其中,以品种优良的欧洲葡萄（Vitis vinifera L.）的栽培面积最大,但其抗寒能力较差,极大地限制了其在寒冷地区的栽培。原产中国的山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）是葡萄属中最抗寒的种,挖掘山葡萄中的抗寒基因,探究其基因功能和作用机理,并通过分子育种手段提高欧洲葡萄抗寒性具有重要意义。本研究是在课题组前期获得的抗寒转录因子基因VaDREB,并通过酵母双杂交筛选出VaDREB互作蛋白VaCP17的基础上,开展了:（1）VaCP17基因克隆、蛋白亚细胞定位、组织特异性分析,进一步通过向拟南芥中转VaCP17基因,从寒胁迫下转基因拟南芥的表型、生理生化指标、抗寒相关基因的表达变化,分析其抗寒功能;（2）从山葡萄‘双优’和欧洲葡萄‘红地球’中分别克隆CP17基因的启动子序列,构建至GUS表达载体,瞬时转化本氏烟草叶片,4℃处理后分析启动子表达活性;（3）酵母双杂交技术筛选VaCP17的互作蛋白,初步揭示VaCP17抗寒分子机制。获得的主要结果如下:1.以VaCP17基因序列片段为基础,对山葡萄‘双优’的cDNA进行编码区PCR扩增,获得VaCP17的CDS序列长1404 bp,编码467个氨基酸,含有Inhibitor＿I29、Peptidase＿C1A和GRAN三个保守结构域。序列比对结果表明,其与欧洲葡萄‘黑比诺’CP17基因同源性为99%,有5个碱基突变。将VaCP17转化至拟南芥原生质体,发现VaCP17定位于细胞膜上。组织表达特异性分析表明,CP17在山葡萄‘双优’和欧洲葡萄‘红地球’的不同器官中的表达具有差异性,以‘双优’的茎中、‘红地球’花中表达量最高。2.通过构建过表达载体,将VaCP17转入拟南芥中,获得了T3代转基因植株;经-6℃寒胁迫处理发现,野生型拟南芥叶片出现萎蔫现象早于转基因株系,且其电导率和MDA高于转基因株系,脯氨酸、可溶性糖含量及SOD、POD和CAT活性均低于转基因株系。4℃低温处理48 h后,测定转基因植株中抗寒相关基因（CBF1、CBF2、CBF3、RD29A、COR15A、KIN1、NCED3、AOC1和JAZ10）的相对表达量变化,表明这些基因的表达量均有上调。3.从‘双优’和‘红地球’中分别克隆了CP17基因的启动子片段PVaCP17和PVvCP17,对顺式作用元件的分析结果表明,PVaCP17和PVvCP17序列中均含有逆境相关顺式作用元件ERE、ABRE、MBS等,但在种类和数量上存在差异。将PVaCP17和PVvCP17分别构建至GUS融合载体后瞬时转化本氏烟草,经4℃低温处理后,进行GUS蛋白活性定量分析,结果表明PVaCP17和PVvCP17均受4℃低温诱导表达,但PVaCP17的GUS活性更强。4.通过酵母双杂交技术,获得了与VaCP17互作的蛋白NAC domain-containing protein 72（NAC72）,Calmodulin-7（CAM7）和Dehydration inducing protein 19（Di19）,进一步通过双分子荧光互补（Bi FC）验证,表明VaCP17能够与VaNAC72、VaCAM7、和VaDi19在体内互作。