hepaCAM基因对人膀胱癌T24细胞粘附力影响及其机制的研究

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目的研究转染外源性野生型hepaCAM基因对人类膀胱移行细胞癌T24细胞粘附力的影响及其机制。方法扩增并鉴定质粒;实验分为空白对照组,阴性对照组和实验组,脂质体介导的基因转染技术,将pEGFP-N2-hepaCAM质粒、阴性质粒分别转染入人膀胱癌T24细胞,用潮霉素(G418)(400μg/ml)筛选出抗性克隆;Western blot检测GFP蛋白表达,间接反映hepaCAM蛋白表达;T24细胞与血管内皮细胞粘附实验观察转染hepaCAM基因的T24细胞粘附力的改变;激光共聚焦显微镜观察T24细胞肌动蛋白细胞骨架的形态学变化;用流式细胞仪检测T24细胞肌动蛋白的含量变化。结果酶切及测序鉴定结果表明:质粒目的片段插入正确;筛选及Western blot实验证实获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞克隆;肿瘤细胞与血管内皮细胞粘附实验证明实验组T24细胞的粘附能力明显高于空白组及阴性对照组(P<0.05);激光共聚焦显微镜下观察实验组T24细胞纤维状肌动蛋白荧光增强,亮度增加,按细胞极性方向排列紧密规则。空白组及阴性对照组T24细胞纤维状肌动蛋白荧光弥散,亮度降低,极性消失,排列疏松不规则;流式细胞分析仪检测证明实验组T24细胞纤维状肌动蛋白含量明显高于空白组及阴性对照组(P<0.05)。结论hepaCAM基因显著增强人膀胱癌T24细胞的粘附力,其机制可能是通过促使球状肌动蛋白向纤维状肌动蛋白聚合,纤维状肌动蛋白按细胞极性方向排列紧密规则的方式重组人类膀胱移行细胞癌T24细胞肌动蛋白骨架,从而抑制肿瘤细胞的侵袭与转移。
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