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本文建立了定量检测血小板活化因子(Platelet activating factor,PAF)的方法——血小板凝集生物学检测法,检测了大熊猫配种前后血浆中PAF的含量;采用酶水解底物显色法测定大熊猫配种前后PAF乙酰水解酶(PAF Acetylhydrolase,PAF-AH)活性,探讨了大熊猫血浆中PAF与早孕相关性血小板下降的关系,以及定量检测血浆PAF含量、PAF-AH活性应用于大熊猫早孕诊断的可行性。 在血小板凝集生物学检测法的建立中发现,薄层层析法纯化PAF的回收率为96.3%。适宜的血小板浓度范围为3.5~4.0×1011/L(此时有较大的聚集率);在小于3.5×109/L时聚集率较低,大于4.0×109/L时聚集率变化大,结果不稳定。标准PAF诱导洗涤血小板聚集的线性范围为2/10ug/L。 本研究检测了大熊猫配种前后血浆中PAF含量与PAF-AH活性。若以大熊猫尿中雌激素水平陡然下降的当天或者首次能够进行自然交配的当天为0天,在0-2天连续采集大熊猫血浆样品,同时检测大熊猫外周血小板数。根据大熊猫外周血小板数的变化,将受试大熊猫分为外周血小板显著下降组和未显著下降组,研究发现,两组相比0天以后PAF值差异不显著(3.85±0.60 ug/L VS 3.79±0.76 ug/L,P>0.05);根据大熊猫产仔情况将大熊猫分为产仔组和未产仔组,比较后发现,1或2天大熊猫外周血中PAF值差异不显著(3.80±0.78 ug/L VS 3.79±0.76 ug/L,P>0.05)。采用酶水解底物显色法检测大熊猫(n=2)配种前后血浆中的PAF-AH活性后,初步发现d血浆样品中PAF-AH活性下降[从12.42nmol.min-1.ml-1下降到10.27nmol.min-1.ml-1;从13.33nmol.min-1.ml-1下降到12.11 nmol.min-1.ml-1]。以上结果说明:通过检测大熊猫血浆中PAF含量进行大熊猫超早孕诊断,该途径难度较大,建议尝试其它途径继续该项研究。血浆PAF-AH活性可能在早期妊娠中有所变化,需要进一步探讨。