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目的:裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook)为马鞭草科(Verbenacase)紫珠属(Callicarpa)植物,海南道地药材,主要药用部位为叶子,具有解毒疗疮和收敛止血以及驱风祛湿的功效,可用于治疗烫伤、烧伤及外伤出血等。现有研究表明裸花紫珠提取物具有促进止血、抑制血栓形成、抑制细菌和细胞毒活性、抵抗炎症、加强免疫等药理活性。文章主要是筛选具有止血活性的提取部分,并从血小板活化角度初步探索其止血活性及其作用机理。方法:(1)应用了断尾巴法和田岛改良法考查裸花紫珠提取物对小鼠出血时间(BT,Bleeding time)和凝血时间(CT,Clotting time)的作用。将裸花紫珠的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水四个部分分批分别进行试验,取同批小鼠50只,随机分空白对照组、阳性药云南白药组以及裸花紫珠提取物高剂量组、中剂量组、低剂量组共五组,根据体重剂量连续体内给药3d,确定有效部位。(2)在此基础上,采用大鼠,分组同上,给药10d,对裸花紫珠的乙酸乙酯、正丁醇部分进行凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)试验。(3)采用血小板计数法和微量反应板法,观察裸花紫珠提取物对大鼠血小板的数目和活性的影响,并考察了裸花紫珠提取物对大鼠血小板中凝血酶/抗凝血酶复合物(TAT)、P-选择素(SELP)、血栓素B2(TXB2)、6-酮前列腺素(6-K-PG)含量的影响。(4)最后,采用Western blot法检测裸花紫珠提取物对大鼠血小板中Akt、P38MAPK、Erk等信号转导分子表达的影响,明确止血机理。结果:(1)裸花紫珠的石油醚、水提取部分对小鼠BT和CT影响不大,无显著性差别(P>0.05),而乙酸乙酯和正丁醇提取部分对小鼠BT和CT有一定的影响。与空白组对比,阳性药云南白药组和不同剂量乙酸乙酯部分组均可显著缩短小鼠BT(P<0.01)和CT(P<0.05)。与乙酸乙酯提取部分作用类似,不同剂量正丁醇提取部分也可显著缩短小鼠BT(P<0.01)和CT(P<0.05)。(2)在凝血四项实验中,裸花紫珠的乙酸乙酯、正丁醇提取物对PT、FIB、TT均无显著影响(P>0.05),但均可降低APTT,并有显著的统计学差异(P<0.05)。(3)在血小板实验中发现,与空白组比较,裸花紫珠乙酸乙酯、正丁醇提取物均可显著升高受试动物血小板计数(P<0.05);血小板聚集中发现,在ADP(浓度5.46 mmol/L)诱导下,裸花紫珠乙酸乙酯、正丁醇部分均可以升高受试动物血小板聚集率,与空白组相比,聚集率有显著性变化(P<0.05);在血小板TAT、TXB2、6-K-PG、SELP的含量检测中发现:这两个提取部位对血小板中TAT均无显著影响(P>0.05),而均可升高血小板TXB2、6-K-PG、SELP的含量,且有明显的差异(P<0.05)。(4)在Western blot实验中,裸花紫珠乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物均可显著刺激Akt、p-Akt的表达,与空白组比较Akt、p-Akt与β-actin的相对光密度值均增大,而对其它两个蛋白的影响不大。结论:(1)裸花紫珠乙酸乙酯和正丁醇部位均可缩短BT和CT,降低APTT,则有止血活性;(2)裸花紫珠乙酸乙酯和正丁醇部位均可增加血小板数量并刺激血小板活化,则有止血作用;(3)裸花紫珠乙酸乙酯和正丁醇部位的止血活性可能通过影响血小板的血小板表面的ADP受体下P2Y12的信号转导。