【摘 要】
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根瘤菌所产生的结瘤因子是豆科植物与根瘤菌建立共生固氮体系的信号分子，豆科植物LysM-RLK是识别根瘤菌结瘤因子的受体激酶。在模式豆科植物百脉根中结瘤因子受体激酶被命名为
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根瘤菌所产生的结瘤因子是豆科植物与根瘤菌建立共生固氮体系的信号分子，豆科植物LysM-RLK是识别根瘤菌结瘤因子的受体激酶。在模式豆科植物百脉根中结瘤因子受体激酶被命名为NFR1和NFR5，它们可能形成异源二聚体共同识别和接受结瘤因子而开启宿主内共生信号转导途径。为了深入理解豆科植物与根瘤菌共生体形成的机制，本研究在分离到与结瘤因子受体激酶NFR5相互作用的小G蛋白ROP6的基础上，通过酵母双杂交技术，从百脉根AD-cDNA文库中筛选并鉴定出与ROP6相互作用的阳性克隆。主要研究结果如下：
1．对得到的酵母阳性克隆子，经分离靶质粒、PCR扩增、酶切鉴定证实含有外源片段及其大小，并通过回转酵母进一步验证与诱饵质粒上ROP6间的相互作用。然后，经DNA序列测定和NCBI数据库BLAST分析结果表明，其目的DNA编码网格重链蛋白CHC的两个模体，命名为CHCR。
2．在酵母体内研究了网格重链蛋白CHCR与ROP6、CA突变体(ROP6组成型活化突变体)和DN突变体（ROP6功能缺失突变体）间的相互作用。实验结果表明，ROP6的两种突变体都能与网格重链蛋白CHCR互相作用。
3．分别在大肠杆菌中表达并纯化CBD-CHCR和His-ROP6融合蛋白，利用Pull-down技术证实了CHCR和ROP6的体外相互作用。同时，双分子荧光互补(BiFC)研究结果说明了CHCR和ROP6在烟草叶片表皮细胞中的相互作用。
4．利用酵母双杂交技术，研究了与ROP6相互作用的CHCR模体，含单个CHCR模体的蛋白不能与ROP6相互作用；同时含有2个CHCR模体的蛋白才能与ROP6相互作用。
5．以CHCR为诱饵蛋白筛选百脉根cDNA文库，获得了网格轻链蛋白和C3HC4类型的E3连接酶的RING结构域。
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